[发明专利]一种用于肿瘤治疗的SN38前体药物的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于肿瘤治疗的SN38前体药物的制备方法。本发明的SN38前体药物，通过亲水性的聚乙二醇修饰SN38，有效地改善了SN38在水中的溶解性；在PEG的另一端连接CPP，通过自组装方法合成CPP‑PEG‑SN38胶束，有效地提高SN38前体药物的细胞膜穿透能力，增加SN38的生物利用率。SN38前体药物制备方法简单、操作方便，是一种适用于SN38递送的安全有效的传递系统。

技术领域

本发明公开一种用于肿瘤治疗的SN38前体药物，同时还提供了其制备工艺，属于医药生产技术领域。

技术领域

恶性肿瘤是全球主要的致死疾病之一，严重威胁人类健康。恶性肿瘤的临床治疗手段仍以手术和化疗为主。7-乙基-10-羟基喜树碱（SN38）可特异性地抑制拓扑异构酶Ι的活性，是一种传统的抗肿瘤药物，具有广谱的抗肿瘤活性，但由于自身的理化性质、药理学特点和毒性限制，使其在大部分可注射溶剂中溶解性差，限制了其应用。因此，提供一种能改善其溶解性并提高其细胞摄取能力的方法是本发明要完成的任务。

细胞穿膜肽（Cell penetrating peptide, CPP）是一类可以安全高效转染小分子药物、抗体、多肽、脂质体、纳米粒、核酸等物质进入细胞的短肽。根据CPP的物理化学性质，可以将其分为3类：阳离子CPP，两亲性CPP，疏水性CPP。CPP中阳离子多肽占大多数，也是使用较为广泛的CPP，最著名的阳离子CPP是HIV蛋白来源的TAT，它们具有细胞膜穿透和细胞核定位功能。至少具有8个精氨酸残基的富含精氨酸多肽序列（如R8）也被用于增强药物细胞摄取。在多肽序列中，碱性氨基酸特别是精氨酸的丰度对多肽的转导功能具有关键作用，在生理pH下，精氨酸中的胍基诱导多肽很容易穿透细胞膜。虽然赖氨酸与精氨酸带有相同的正电荷，但由于缺少胍基，赖氨酸序列的细胞膜穿透效率显著低于精氨酸。这些带有正电荷的多肽与细胞膜上带负电荷的糖蛋白结合，发挥细胞膜穿透作用。第二类多肽主要是嵌合的两亲性CPP，例如MPG、transportan、Pep-1（第一个商用的CPP）、pVEC（电荷与疏水性氨基酸分置于长链不同部位）或者两亲性的α-螺旋、β-折叠多肽（这些折叠多肽的次级结构中，疏水与亲水的氨基酸占据螺旋表面的不同位置，如MAP、VT5）。第三类多肽为疏水CPP，包括天然的氨基酸序列和化学修饰的多肽。疏水CPP可以通过疏水作用与细胞膜融合直接穿透进入细胞，从而避免内吞过程中CPP降解，如PFV等。

采用亲水性的聚乙二醇（PEG）修饰SN38，能够改善SN38在水溶液中的溶解性，在PEG的另一端连接CPP，通过自组装方法合成CPP-PEG-SN38胶束，能够有效地提高SN38前体药物的细胞膜穿透能力，以达到目的。

发明内容

本发明采用固相多肽合成的方法，制备五种具有代表性的CPP：R8、P28、PFV、SAP(E)和TAT。其中R8与TAT为亲水性的阳离子CPP；P28为具有α-螺旋、β-折叠结构的两亲性阴离子CPP；PFV为中性的疏水CPP；SAP(E)为具有螺旋结构的两亲性阴离子CPP。

本发明以PEG作为linker分别通过酯键、二硫键连接SN38和CPP合成五种前体药物CPP-PEG-SN38胶束，SN38溶解度高，细胞摄取能力强。

本发明进一步提供了SN38前体药物（CPP-PEG-SN38胶束）的制备工艺，粒径低于300 nm，粒度均一，分散性好。

本发明所述的一种SN38前体药物制备方法，包括以下步骤：

1、PEG-SN38的制备