[发明专利]一种血浆中特异性IgM抗体的定量测定方法

权利要求书

1.一种血浆中特异性IgM抗体的测定方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)将同一份血浆样本分成2组，作为待测血浆和待处理对照血浆；

2)使用过量的抗原与待处理对照血浆孵育，完全中和去除该血浆中的待检抗体，获得对照血浆；

3)以待测血浆和对照血浆为样本，使两组血浆内组分与连接到固相载体的对应抗原结合，形成复合物；加入生物素化二抗结合该复合物，再加入链霉素标记的信号分子，使信号分子间接地连接于前述固相载体；通过检测该信号分子，产生可量化数据，并将2组可量化数据相减，得到检测数据；

4)将检测数据代入标准曲线，计算获得特异性IgM抗体的含量；

所述抗原是待检抗体的抗原；

步骤3)所述的信号分子为酶、化学发光分子、荧光分子或放射性元素；

步骤4)所述标准曲线是以浓度已知的血浆或同种动物上千个体的混合血浆作为标准品进行稀释后，按步骤1)～3)得到检测数据，与血浆浓度或稀释倍数数据分别取对数后，作出的标准曲线。

2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于：

步骤3)所述的酶为碱性磷酸酶，通过加入碱性磷酸酶的底物产生显色反应，测定吸光度得可量化数据。

3.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于：

所述血浆为人血浆，步骤4)所述动物为人。

4.如权利要求1～3任一所述的测定方法，其特征在于：

所述特异性IgM抗体的抗原为β-淀粉样蛋白。

5.如权利要求4所述的测定方法，其特征在于：

所述β-淀粉样蛋白为Aβ₄₂寡聚体。

6.如权利要求5所述的测定方法，其特征在于：所述Aβ₄₂寡聚体的制备方法如下：

向Aβ单体中加入聚合液，在4℃条件下聚合48-72h；

所述聚合液成分包括0.005～0.015M PBS、0.07～0.1％质量体积比的NaCl、0.025％～0.075％质量体积比的SDS，介质为水，pH为7.0～7.4；

优选地，所述聚合液成分包括0.01M PBS、0.085％质量体积比的NaCl、0.05％质量体积比的SDS，介质为水，pH为7.2。

7.如权利要求5所述的测定方法，其特征在于：所述步骤2)的孵育过程中，抗原的浓度为50～100μg/ml。

8.如权利要求5所述的测定方法，其特征在于：

步骤2)的孵育在pH为7.2～9.6的环境中进行。

9.如权利要求5～8任一所述的测定方法，其特征在于：

步骤2)的孵育的温度为4或37℃。

10.如权利要求5～8任一所述的测定方法，其特征在于：

步骤2)的孵育时间为1～3h。