[发明专利]一种生物菌肥发酵过程中阿魏酸含量的快速检测方法

说明书

本发明公开了一种生物菌肥发酵过程中阿魏酸含量的快速检测方法，具体操作方法为：选取发酵过程中的发酵物100g，用10ml的95%乙醇和190ml的水加盖浸提2h，将浸提液稀释40倍后，在330nm波长下；以无菌水为参比测定吸光度，测得的吸光度代入标准曲线1的回归方程中，得出的浓度先乘以稀释倍数40，再乘以纯度系数81.36%，即可得到该阶段发酵物中阿魏酸的含量。本发明的优点：该方法简单可行，利用无菌水+95%乙醇的配比提取阿魏酸损失较小，并且提取时间短，得出来的数据回归性好，可信度高。

技术领域

本发明涉及阿魏酸含量检测技术领域，具体是指一种生物菌肥发酵过程中阿魏酸含量的快速检测方法。

背景技术

“高氏15号”是湖北省农科院植保土肥研究所发现的一种新型生防菌，以其为原料制作的生物菌肥的发酵工艺已经实现了一定的工厂生产化，在生产过程中，对关键指标的跟踪检测是用来判断发酵程度的重要手段。除了pH、温度等物理指标外，发酵产物中阿魏酸的含量可以作为判断发酵程度的重要依据，因为在高氏15号等微生物菌株的发酵物料中有大量的秸秆、米糠等作物的根茎叶部分，这些部分含有较为丰富的阿魏酸，在腐熟发酵过程中会释放出大量游离态的阿魏酸。

现有的微生物菌株发酵产物中测定阿魏酸含量的方法有高效液相色谱法，薄层扫描法、毛细管电泳法等，但这些方法所需要的仪器设备昂贵，操作也较为繁琐。

发明内容

本发明为了解决上述的各种问题，提供了一种生物菌肥发酵过程中阿魏酸含量的快速检测方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种生物菌肥发酵过程中阿魏酸含量的快速检测方法，包括以下步骤：

步骤一：准备试验材料

不同发酵时期的微生物菌株发酵产物，反式阿魏酸标准品，95％乙醇，冰醋酸，甲醇，氯仿，紫外分光光度计，万分之一电子天平；

步骤二：试验方法

预试验，具体包括以下步骤：

A.阿魏酸标准液的配制

(1)精确称取阿魏酸标准品20mg于2ml离心管中，先用50μl的95％乙醇溶解，再加入1.95ml的无菌水，取10μl该溶液，用无菌水稀释至1ml，即可得到浓度为0.1mg/ml的阿魏酸标准液①；

(2)精确称取阿魏酸标准品20mg于2ml离心管中，用2ml的95％乙醇溶解，取10μl该溶液，用无菌水稀释至1ml，即可得到浓度为0.1mg/ml的阿魏酸标准液②；

B.阿魏酸标准曲线的绘制

(1)用无菌水将0.1mg/ml的阿魏酸标准液①配制成0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.3μg/ml、0.4μg/ml、0.5μg/ml、0.6μg/ml、0.7μg/ml这7个浓度梯度；以无菌水为参比，在330nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，计算回归方程，得到标准曲线1；

(2)用95％乙醇将0.1mg/ml的阿魏酸标准液②配制成0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.3μg/ml、0.4μg/ml、0.5μg/ml、0.6μg/ml、0.7μg/ml这7个浓度梯度；以无菌水为参比，在330nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，计算回归方程，得到标准曲线2；

步骤三：样品处理

A.微生物菌株浸提液的制备

称取微生物菌株发酵产物100g，按质量体积比1：2：0.2加入无菌水和95％乙醇，加盖静置2h，双层纱布过滤，制得浸提液；

B.层析液的选择及配制