[发明专利]一种制备重组金黄色葡萄球菌疫苗的方法

说明书

本发明提供了一种制备重组金黄色葡萄球菌疫苗的方法，解决了现有技术中制备重组金黄色葡萄球菌疫苗时，抗原蛋白纯化工艺在放大过程中出现纯化收率低，蛋白收获量少的技术问题。它包括下述步骤：S1、将疫苗抗原组分HI蛋白原液、SpA5蛋白原液、mSEB蛋白原液及MntC蛋白原液混合，得到蛋白原液混合液；S2、将蛋白原液混合液稀释；S3、稀释磷酸铝溶液，得到佐剂稀释液；S4、将蛋白原液稀释液和佐剂稀释液混合，在室温密闭吸附后得到疫苗半成品；S5、将步骤S4得到的半成品检测合格后进行成品分装和包装。本发明提供的制备重组金黄色葡萄球菌疫苗的方法，在制备重组金黄色葡萄球菌疫苗时，抗原蛋白纯化工艺在放大过程中纯化收率高，蛋白收获量高。

技术领域

本发明涉及一种制备重组金黄色葡萄球菌疫苗的方法。

背景技术

HI蛋白，金葡菌Hla是细菌pore-forming barrel毒素家族最主要的成员，分子量大小为30kD，是金葡菌感染的最主要的致病因子。Hla是一种外毒素，通常由致病性金葡菌特别是MRSA产生。其可通过促使中性粒细胞裂解，以及对上皮细胞的损害而发挥生物学效应，引起菌血症等临床症状。Hla缺失的突变株在侵入性感染动物实验中毒力减弱，致病作用减小。Wardenburg等构建了无毒的缺乏裂解细胞活性的突变体Hla(H35L)，免疫小鼠后诱导产生了高效价的保护性抗体，能够有效中和Hla，从而降低了金葡菌感染后的致死率。表明无裂解特性的无毒Hla突变体可以作为金葡菌疫苗的候选抗原分子。

SpA5抗原蛋白，金葡菌临床分离株均表达SpA，表明SpA为一种高度保守的抗原成分。其分子量为55kDa，分布在细胞壁表面。成熟肽的N端包含5个56-61氨基酸残基的Ig结合结构域，卷曲成三个alpha螺旋束。该结构域能结合于哺乳动物IgG，从而抑制宿主调理吞噬作用。亦能与VH3型的B细胞受体结合，使B细胞凋亡而破坏获得性及天然免疫应答。

在金葡菌感染的脓毒性关节炎、败血症和皮肤脓肿的小鼠模型中，SpA缺陷突变的金葡菌毒力降低，其原因认为是与IgG-Fc结合的SpA减少，降低了金葡菌的抗吞噬作用。SpA抗吞噬作用的机制可能为：①SpA与IgG结合消耗了免疫球蛋白，致使其与吞噬细胞Fc受体的结合减少，降低IgG的调理作用；②葡萄球菌外包被了IgG，在空间上阻止了吞噬细胞与葡萄球菌的接触及吞噬作用。

SpA是一个能和多种宿主成分起作用的多能毒力因子。SpA的Fc结合区域也能与TNFR1结合，发挥肿瘤坏死因子(TNF)样作用，启动TNF信号级联放大反应，发挥促炎效应，这是葡萄球菌性肺炎致病的关键。

SpA可以在IgG存在情况下与血管性假血友病因子(vonWillebrand factor，vWF)结合。vWF是止血过程中一个关键因子，遗传性vWF缺陷可导致严重出血的血友病症状。vWF的主要功能是捕捉血循环中的血小板，并将其固定在血管损伤处，同时刺激血凝块的形成。SpA也可通过Spa-gC1qR/p33直接与血小板结合。SpA是一种黏附因子，其与血小板结合有助于金葡菌在血管内损伤处定植，在血管内感染和感染性心内膜炎的发生过程中起重要作用。

MntC抗原蛋白，金葡菌的生存需要多种金属离子，它们参与多种生化过程，如新陈代谢，DNA合成和毒力因子的监管等。这些离子的代谢需要特定功能蛋白的支撑，若通过疫苗产生针对特定蛋白的抗体阻断其功能，就可抑制金葡菌的代谢与生长。

锰离子代谢相关蛋白主要包括一个ATP合成蛋白MntA、一个完整的细胞膜转运蛋白MntB和一个锰离子转运蛋白MntC。其中锰离子转运蛋白C(MntC)是一个高度保守的细胞表面蛋白，最新的MntC结构研究结果显示，MntC蛋白具有经典的双结构域结构，每个结构域由α螺旋之间“夹心”四股β链组成，其两个结构域通过一个长链8倍螺旋和紧附在两个结构域表面的金属结合位点相连，MntC同源的两个结构域由一个长的α-螺旋作为骨架蛋白支撑，使得其结构更稳定，不易突变，进而形成高度保守的序列。