[发明专利]RhD-T163P突变体及其检测

说明书

本发明公开了RhD‑T163P突变体及其检测。该发明提供一种RhD血型抗原RhD‑T163P突变体RHD487AC等位基因位点g.25300946AC突变。设计出针对基因突变位点的引物序列，通过基因扩增方法对包含基因突变的区域进行RHD487AC等位基因检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其涉及RhD-T163P突变体及其检测。

背景技术

Rh血型是人类红细胞血型系统中最为复杂、最具多态性的系统，也是引起临床输血反应和严重新生儿溶血病的主要红细胞血型。目前已发现50多种Rh血型抗原，其中RhD抗原具有很强的免疫原性，是由RHD基因编码产生，是血型研究的重点。临床上根据红细胞膜表面是否检测到D抗原，将Rh血型抗原分为RhD阳性和RhD阴性两大类。

目前，Rh血型D抗原的常规检测方法是采用血清学盐水法和间接抗人球蛋白试验以及吸收放散试验进行鉴定。但是血清学技术存在一定的局限性。由于疾病或其他因素的影响，某些个体的红细胞在血清学定型时结果难以判定；慢性长期输血患者血清学结果有时呈现“混合视野”的现象；当无法获得样本的红细胞或红细胞样本不足时，像胎儿血型鉴定、法医鉴定遗留物等，血清学检测也不能获得正确结果。

用免疫血清学的方法对RhD血型的检测主要依赖于抗-D抗体的特异性和抗原表达量。目前随着分子生物技术的发展，RhD突变体逐年增加，其抗原表达量和基因突变位点各有差异。这些基因突变体的检测主要通过分子生物学方法确定Rh血型D抗原基因型，不仅在弥补血清学技术的不足上具有重要的临床实用意义，而且还具有广泛的科研应用价值。所以有必要提供一种RhD-T163P突变体及用于检测的特异性引物。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种RhD-T163P突变体及用于检测的特异性引物。

技术方案：为实现上述目的，本发明的RhD-T163P突变体，是指RhD血型抗原RhD-T163P突变体RHD487AC等位基因位点g.25300946AC突变；突变位点在SEQ ID NO:1序列的第273位碱基A突变为C，其突变基因DNA序列如SEQ ID NO：2所示。

一种用于检测RhD-T163P突变体的特异性引物，该特异性引物的上游引物序列如SEQ ID NO:3所示，下游引物序列如SEQ ID NO:4所示；该特异性引物用于检测RHD487AC等位基因。

本发明检测方法是利用人类RhD血型不同等位基因特异性序列位点的改变，设计出针对性引物序列进行聚合酶链反应来完成的。

该突变发生于第1号染色体的25300946位置。该基因在NCBl参考数据库GRCh38.p13中的编号为NC_000001.11(25272393-25330445)。这里列出在该数据库中包含有本位点野生型的部分碱基序列供参考，如SEQ ID NO：1所示，RHD基因突变相对应的序列如SEQ ID NO：2所示。其中突变位点在SEQ ID NO:1序列的第273位由碱基A突变为C。所述RHD基因编码序列野生型氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，其中氨基酸改变在SEQ ID NO：6序列的第163位由苏氨酸(T)转变为脯氨酸(P)。

SEQ ID NO:1