[发明专利]一种快速定量检测BPA的荧光方法

说明书

本发明公开了一种快速定量检测BPA的方法，使用BPA适配体的特异性来实现对样品中BPA快速定量检测；具体包括针对BPA的结构合成5′端具有FAM标记的富含C和G的适配体序列，在氧化石墨烯和聚乙烯吡咯烷酮存在的条件下，和不同浓度的BPA的溶液混合后检测特定峰值的荧光强度，以此绘制出标准曲线；通过将待测样品的荧光与标准曲线比较来定量的检测样品中的BPA的浓度；本发明方法可以广泛的应用于食品、农业、医药等领域。

技术领域

本发明属于双酚A类物质残留检测领域，具体公开了一种快速定量检测BPA的荧光方法。

背景技术

BPA，即双酚A，是一种有机化合物，分子式为C₁₅H₁₆O₂是一种重要的工艺原料，用来合成聚碳酸酯和环氧树脂等材料，其被广泛应用于日常生物的塑料材料中。60年代以来就被用于制造塑料（奶）瓶、幼儿用的吸口杯、食品和饮料（奶粉）罐内侧涂层。BPA无处不在，从矿泉水瓶、医疗器械到及食品包装的内里，都有它的身影。BPA很难降解，并且会从容器中浸出到食品和饮料中。近年来，有研究表明BPA具有模仿雌激素的活性，在严重的情况下会导致性早熟，代谢紊乱甚至癌症。因此，BPA含量的测定具有积极的意义。目前，用于检测BPA的方法主要有色谱、质谱、化学发光、电化学法等。但是上述检测方法或者需要昂贵的大型仪器，对操作人员要求较高，比如色谱和质谱法；或者检测特异性不高，检测方法繁琐，费事费力，需要使用有毒化学试剂等等。因此，目前急需开发一种灵敏度较好，操作简便的方法。

发明内容

针对上述情况，本发明的目的是提供一种快速准确、灵敏度较高的BPA的检测方法，本发明设计了荧光探针标记的适配体， 通过荧光信号检测BPA。

本发明的技术方案如下：

一种快速定量检测BPA的荧光方法，包括以下步骤

S1.针对BPA的结构，合成5′端具有FAM标记的富含C和G的适配体序列；所述序列长度为50-70bp之间；所述适配体序列保存于Tris溶液中，为溶液A；

S2.在上述溶液A中加入不同质量的BPA，放置10-60min，形成不同浓度的溶液B；

S3.配置氧化石墨烯溶液，与等体积聚乙烯吡咯烷酮溶液混合均匀，静置10-60min，为溶液C；

S4.混合溶液B和C，静置20-80min，得到溶液D，开始检测含有不同浓度BPA的溶液D的荧光信号；

S5.根据检测结果绘制标准曲线，随后进行未知样品的浓度检测，未知样品的浓度根据荧光信号值由标准曲线求出。

进一步的，上述一种快速定量检测BPA的荧光方法，所述步骤S1中的适配体序列为SEQ ID NO.1=-FAM-5′CCG GTG GGT GGT CAG GTG GGA TAG CGT TCC GCG TAT GGC CCAGCG CAT CAC GGG TTC GCA CCA-3′。

进一步的，上述一种快速定量检测BPA的荧光方法，所述步骤S1中的溶液A为适配体序列浓度为1mM、 pH 7.4的Tris溶液。

进一步的，上述一种快速定量检测BPA的荧光方法，所述步骤S2中的溶液A的体积范围为50-200ul。

进一步的，上述一种快速定量检测BPA的荧光方法，所述步骤S3中的氧化石墨烯溶液的浓度为50-200ug/ml。

进一步的，上述一种快速定量检测BPA的荧光方法，所述步骤S3中的聚乙烯吡咯烷酮的浓度为10-40ug/ml。

进一步的，上述一种快速定量检测BPA的荧光方法，所述步骤S4中的溶液B的体积为800ul，所述溶液C的体积为200ul。

进一步的，上述一种快速定量检测BPA的荧光方法，所述步骤S5中的标准曲线的回归方程为Y=2.640+1.156X。