[发明专利]一种链霉菌改造菌及其在降解羽毛中的应用

权利要求书

1.一种链霉菌改造菌，其特征在于：

是以链霉菌(Streptomyces sp.)SCUT-1为出发菌，利用基因工程技术构建的过表达半胱氨酸双加氧酶CDO1和蛋白酶Sep39的重组菌。

2.根据权利要求1所述的链霉菌改造菌，其特征在于：

所述的半胱氨酸双加氧酶CDO1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述的蛋白酶Sep39的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.权利要求1或2所述的链霉菌改造菌的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、以链霉菌SCUT-1的基因组DNA为模板进行PCR扩增得到片段cdo1和sep39；将所得片段经NdeI和EcoRI双酶切后，分别与经同样双酶切的载体pSET152进行连接，制得重组质粒pSET152-cdo1和pSET152-sep39；

S2、以重组质粒pSET152-sep39为模板进行PCR扩增得到片段ermE*p-sep39；使用NdeI对重组质粒pSET152-cdo1进行单酶切，与所得片段ermE*p-sep39进行双片段重组，制得重组质粒pSET152-cdo1-sep39；

S3、将重组质粒pSET152-cdo1-sep39转化ET12567/pUZ8002感受态感受态细胞，经含卡那霉素和氯霉素的LB培养基筛选，挑取单克隆进行菌落PCR验证，制得阳性菌落ET12567/pUZ8002/pSET152-cdo1-sep39；

S4、将阳性菌落ET12567/pUZ8002/pSET152-cdo1-sep39利用接合转移的方法转移入链霉菌SCUT-1，即获得所述的链霉菌改造菌。

4.根据权利要求3所述的链霉菌改造菌的构建方法，其特征在于：

步骤S1中PCR扩增用到的引物及引物序列如下所示：

cdo1-F：5’-TTTACACATATGACTTCCCCGCCCGAATCACC-3’；

cdo1-R：5’-GAGCGAGAATTCTCAGTGGTCGGCGGGCAG-3’；

sep39-F：5’-TTTACACATATGAAGCGTTTCCGGATCGCAGCCC-3’；

sep39-R：5’-GAGCGAGAATTCGATATCTCAGAGGCCGGACTTGAAC-3’；

步骤S2中PCR扩增用到的引物及引物序列如下所示：

sep39-F-2：5’-CCGCCGACCACTGAGCTAGTATGCATGCGAG-3’；

sep39-R-2：5’-ACAGCTATGACATGATTACGTCAGAGGCCGGACTTGAAC-3’。