[发明专利]CYP2J2基因纳米递送系统及制备方法及在制备治疗下肢缺血药物中的应用

说明书

本发明公开了CYP2J2基因纳米递送系统及制备方法及在制备治疗下肢缺血药物中的应用，制备方法为：(1)在冰浴搅拌下，将鱼精蛋白蒸馏水溶液，滴加至纳米高分子聚合物的二氯甲烷溶液中；(2)将pcDNA 3.1/CYP2J2质粒基因的蒸馏水溶液，滴加到步骤(1)获得的液体中；搅拌；(3)将步骤(2)获得的液体，滴加到聚乙烯醇蒸馏水溶液中，搅拌，挥发去除二氯甲烷，得到CYP2J2基因纳米递送系统。本发明条件温和，简单易行，粒径为纳米级，具有良好的稳定性，缓释性。利用CYP2J2基因及其下游催化产物发挥促血管生成、心血管保护等多种生物学功能，发挥更好的促血管生成作用。可在制备治疗下肢缺血药物中的应用。

技术领域

本发明涉及一种CYP2J2基因递送系统及制备方法及在制备治疗下肢缺血药物中的应用。

背景技术

在我国，下肢缺血性疾病的发病率呈逐年上升趋势，发病率高，且该病的年截肢率及死亡率也在增加。传统外科手术或血管腔内治疗目前是此类患者的临床首选治疗方法，但是仍有约30％的患者因严重的并发症不适合行手术或腔内治疗，使得非手术治疗实现治疗性血管生成显得尤为重要。

下肢缺血性疾病是炎症、缺氧、高氧化应激状态等多种病理因素共同作用的结果，越来越多的证据表明高效递送一个多功能融合的基因或者同时递送多个基因能够更好的促进下肢血管生成。

花生四烯酸(ArachidonicAcid，AA)是生物体内最为丰富的物质之一，在细胞色素P450(Cytochrome P450，CYP450)表氧化酶的作用下，AA被分解为四种不同的环氧-二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids，EETs)，包括5,6-EET，8,9-EET，11,12-EET，14,15-EET。CYP450表氧化酶主要包括2C和2J家族，2C家族在生物体内分布广泛，2J2是唯一存在于人类的2J家族亚型，其在人心肌细胞和内皮细胞丰富表达。我们的前期研究及大量国内外研究证实了CYP2J2及其下游产物EETs系统对心血管系统有明显的保护作用以及在视网膜、肝脏、心脏中的促血管生成作用：(1)外源性给予CYP2J2或11,12-EET能够拮抗TNF-α诱导的血管内皮细胞炎症损伤；(2)EETs能够直接促进内皮细胞增殖与新生血管形成，并可能介导了VEGF促进血管形成的效应；(3)EETs显著抑制TNF-α诱导的血管内皮细胞凋亡，可能的机制是通过抑制MAPK去磷酸化与激活PI3K/AKT信号通路。鉴于CYP2J2-EETs系统具有促内皮细胞增殖和血管生成、抗炎、抑制内皮细胞凋亡的多种生物学功能，CYP2J2可能是另一个潜在的多功能融合促进下肢血管生成的因子，但目前未见相关研究报道。

游离的核酸分子在生物体内稳定性差，易被核酸酶快速降解而清除，且其负电性不利于有效地靶向目的细胞。因此，基因治疗需要安全高效的基因载体来保护核酸分子，提高其体内稳定性并实现高效转染，最大限度的发挥目的基因的治疗作用。基因载体通常分为病毒和非病毒两类。凭借高转染效率和长半衰期，病毒成为了常用的基因治疗载体；但病毒载体导致的细胞毒性、免疫原性和致癌作用严重限制它们的应用。2020年1月6日，Science期刊在基于大型成年犬A型血友病基因治疗的一篇报导中再次指出，腺相关病毒(adeno-associated virus，AAV)作为基因载体的潜在致癌性。在脂质体、高分子纳米聚合物、无机纳米粒等非病毒类基因载体中，高分子纳米聚合物胶束依靠良好的生物相容性、生物可降解性和缓释性，越来越多的被运用于基因递送。目前，将高分子纳米聚合物运用于CYP2J2递送以治疗下肢缺血未见报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种CYP2J2基因纳米递送系统。

本发明的第二个目的是提供一种CYP2J2基因纳米递送系统的制备方法。

本发明的第三个目的是提供一种CYP2J2基因纳米递送系统在制备治疗下肢缺血药物中的应用。

本发明的技术方案概述如下：

一种CYP2J2基因纳米递送系统的制备方法，包括如下步骤：