[发明专利]一种基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法在审
申请号: | 202110321633.2 | 申请日: | 2021-03-25 |
公开(公告)号: | CN113151418A | 公开(公告)日: | 2021-07-23 |
发明(设计)人: | 谢全亮;王旭初;李鸿彬 | 申请(专利权)人: | 石河子大学 |
主分类号: | C12Q1/6858 | 分类号: | C12Q1/6858;G06K9/62 |
代理公司: | 成都中弘信知识产权代理有限公司 51309 | 代理人: | 张芳 |
地址: | 832003 新疆维吾尔自治区*** | 国省代码: | 新疆;65 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 形态学 分子 鉴定 识别 橡胶 方法 | ||
1.一种基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法,其特征在于,包括以下步骤:
A选取待测橡胶草完整的植物组织;
B选择所述待测橡胶草进行形态学观察初筛得到一次筛选的橡胶草;
C对筛选后的所述橡胶草进行分子鉴定,对获得的数据进行统计和分析输出结果;
D通过所述结果鉴定识别所述待测橡胶草。
2.根据权利要求1所述一种基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法,其特征在于,所述分子鉴定的方法包括
a利用层析法待测橡胶草提取叶绿体后;
b提取橡胶草叶绿体的总DNA,用橡胶草叶绿体物种特异性标记C5基因进行检测进行PCR后;
c经1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测,其显示橡胶草和普通蒲公英正确条带(659bp),
d用TaqI酶进行PCR产物单酶切,在橡胶草(C5)产物中会出现多条不定片段的多态性现象,酶切后能够出现多态性条带,由此确定为橡胶草。
3.根据权利要求1所述一种基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法,其特征在于,所述形态学观察的方法包括
A获取标准橡胶草的特征图像中并选定清晰而且具有特征明显的图形;
B将所述标准橡胶草的图像数据进行记录储存,作为待测橡胶草的图像比对的标准图像数据并储存于植物特征数据库;
C当橡胶草需要进行识别鉴定时,利用植物特征数据库中橡胶草模型或者在实时现场应用同样的方法测量橡胶草特征图形对应的数据进行计算并比对。
4.根据权利要求2所述一种基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法,其特征在于,所述反应体系为:
DNA 2μL
TaKaRa 1×PCRMix7μL
Primers 1μL
ddH2O 10μL
Totalvolume 20.0μL
反应条件设定为:预变性94℃,3min;变性94℃,30sec,退火54℃,30sec,延伸72℃,1min,循环30次;72℃,10min;4℃存放。
5.根据权利要求2所述一种基于形态学和分子鉴定识别橡胶草的方法,其特征在于,以橡胶草叶绿体(Chloroplast)基因特异引物C5(InterspacebetweentrnN-GUUandrps15)作为检测引物进行PCR反应,引物序列为:Annotation:C5
(InterspacebetweentrnN-GUUandrps15)
Forwardprimer:5′-TCAAAGGATCTATGCGCAATCA-3′
Reverseprimer:5′-TCGAGAATTGAAGACCCCTAGT-3′
C5基因总长Length:462bp,time:54℃,
Enzyme:TaqI,TKS:Polymorphic,TO。
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