[发明专利]猪带绦虫Ts14-3-3.3 DNA疫苗制备及鉴定方法

权利要求书

1.一种猪带绦虫Ts14-3-3.3 DNA疫苗的制备方法，其特征是，包含以下步骤：

1）采用PAS法，全基因合成SEQ ID NO .2所示的Ts14-3-3.3和SEQ ID NO .1所示的sp-Ts14-3-3.3抗原编码基因；

2）分别将目的基因克隆至真核表达载体pMZ-X3，转入Top10克隆菌株，挑取阳性克隆子测序鉴定和双酶切鉴定重组质粒pMZ-X3-Ts14-3-3.3和pMZ-X3-sp-Ts14-3-3.3；

3）随后制备两种转染级别质粒，并分别转染人293F胚肾细胞，采用Western blot法鉴定；

4）然后将84只雌性Balb/c小鼠随机分成4组，分别为pMZ-X3-Ts14-3-3.3疫苗组，pMZ-X3-sp-Ts14-3-3.3疫苗组，pMZ-X3空质粒对照组，PBS空白对照组；

5）于首次免疫后0w、2w、4w、6w、8w收集小鼠血清和脾淋巴细胞进行鉴定：

①采用间接ELISA法检测血清中特异性IgG及其IgG1和IgG2a亚类水平；

②采用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖水平；

③采用流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群比例；

④采用双抗夹心ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平；

经鉴定上述猪带绦虫pMZ-X3-Ts14-3-3.3和pMZ-X3-sp-Ts14-3-3.3两种DNA疫苗均可诱导小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答。