[发明专利]一种使裂殖壶菌在富含木糖培养基中正常生长且生产脂质化合物的方法

权利要求书

1.一种使裂殖壶菌在富含木糖培养基中正常生长且生产脂质化合物的方法，其特征在于，将裂殖壶菌在含木糖的驯化培养基中进行驯化培养使得裂殖壶菌可以在富含木糖培养基中进行正常生长代谢且生产脂质化合物。

2.根据权利要求1所述的使裂殖壶菌在富含木糖培养基中正常生长且生产脂质化合物的方法，其特征在于，通过在驯化培养基中逐渐增加木糖与葡萄糖的比例使得裂殖壶菌可以在富含木糖培养基中进行正常生长代谢且生产脂质化合物。

3.根据权利要求1或2所述的使裂殖壶菌在富含木糖培养基中正常生长且生产脂质化合物的方法，其特征在于，通过在驯化培养基中逐渐增加木糖与葡萄糖的质量比，优选从等比例按质量分数4.5-5％增加到86-90％。

4.根据权利要求1或2所述的使裂殖壶菌在富含木糖培养基中正常生长且生产脂质化合物的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)将冻存的裂殖壶菌菌种接入以葡萄糖为主要碳源的培养基中进行活化培养，然后转接2～3代培养形成裂殖壶菌种子液；

(2)将裂殖壶菌种子液接种含木糖和葡萄糖的混合培养基中进行第一梯度驯化培养，所述第一梯度的驯化培养基中木糖与葡萄糖的质量比为等比例；

(3)当第一梯度的驯化培养基中菌株浓度以正常生长速度生长到OD₆₀₀为12～18，将第一梯度形成的种子液接入木糖含量增加第二梯度的驯化培养基中继续进行驯化培养，直至菌株可以以正常生长速度生长到OD₆₀₀为12～18；

(4)依次重复步骤(3)进行梯度驯化培养，每个梯度均培养到菌株可以以正常生长速度生长到OD₆₀₀为12～18接种到下一梯度培养，依次培养到木糖与葡萄糖的比例为86-90％的第九梯度；

(5)将步骤(4)驯化后的菌种接种在富含木糖的培养基中进行发酵培养，对发酵后的脂质化合物进行含量及成分的测定。

5.根据权利要求4所述的使裂殖壶菌在富含木糖培养基中正常生长且生产脂质化合物的方法，其特征在于，步骤(2)中将步骤(1)所得种子液接种到以30～60g/L的木糖及其与葡萄糖的等质量比的第一梯度的驯化培养基中，控制菌液的初始浓度OD₆₀₀为0.2～0.3，于28℃～30℃、170～220rpm的条件下培养至0D₆₀₀为12～18，仍然控制起始接种OD₆₀₀为0.2～0.3在第一梯度驯化进行传代，直至菌株的生长速度与在以葡萄糖为碳源的培养基中生长速度一致后，生长到OD₆₀₀为12～18，再按相同的条件接种到步骤(3)中的第二梯度驯化培养基继续驯化。

6.根据权利要求4所述的使裂殖壶菌在富含木糖培养基中正常生长且生产脂质化合物的方法，其特征在于，步骤(4)中以质量分数4.5-5％含量逐渐增大木糖的比例依次接种到第九梯度的驯化培养基中，第九梯度培养基中木糖与葡萄糖的质量比例86-90％。

7.根据权利要求4所述的使裂殖壶菌在富含木糖培养基中正常生长且生产脂质化合物的方法，其特征在于，步骤(5)驯化后的菌种接种在富含木糖的培养基中进行摇瓶发酵培养，最后通过酶解及萃取的方法提取油脂，通过气相色谱观察油脂的产量及组成成份。

8.根据权利要求4所述的使裂殖壶菌在富含木糖培养基中正常生长且生产脂质化合物的方法，其特征在于，各个梯度培养基中除不同比例的木糖与葡萄糖还包括酵母膏10～15g/L、硫酸钠10～15g/L、硫酸镁3～5g/L、硫酸铵5～10g/L、氯化钾1～2g/L、氯化钙0.1～0.2g/L、硫酸钾0.5～1g/L、磷酸二氢钾1～3g/L、谷氨酸钠8～12g/L，七水合硫酸锌1～5mg/L、六水合氯化钴0.01～0.1mg/L、五水合硫酸铜2～6mg/L、六水合硫酸镍1～2mg/L、七水合硫酸铁8～15mg/L、泛酸钙2～4mg/L、四水合氯化锰3～5mg/L、二水合钼酸钠0.04mg/L、维生素B₁9.5 mg/L、维生素B₁₂ 0.15mg/L。

9.根据权利要求4所述的使裂殖壶菌在富含木糖培养基中正常生长且生产脂质化合物的方法，其特征在于，步骤(5)所述富含木糖的培养基包括木糖30～60g/L、酵母膏10～15g/L、苹果酸5～10g/L、玉米浆10～15g/L、硫酸钠10～15g/L、硫酸镁3～5g/L、硫酸铵5～10g/L、氯化钾1～2g/L、氯化钙0.1～0.2g/L、硫酸钾0.5～1g/L、磷酸二氢钾1～3g/L、谷氨酸钠8～12g/L，七水合硫酸锌1～5mg/L、六水合氯化钴0.01～0.1mg/L、五水合硫酸铜2～6mg/L、六水合硫酸镍1～2mg/L、七水合硫酸铁8～15mg/L、泛酸钙2～4mg/L、四水合氯化锰3～5mg/L、二水合钼酸钠0.04mg/L、维生素B19.5 mg/L、维生素B12 0.15mg/L。