[发明专利]一种莫桑比克罗非鱼耐碱性SNP标记及其应用

权利要求书

1.一种与莫桑比克罗非鱼耐碱性相关的SNP标记，其特征在于：所述SNP标记的序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4所示，所述SEQ ID NO：1序列1227bp处或SEQ ID NO：4序列120bp处的SNP位点碱基为G或A，上述SEQ ID NO.1序列1227bp处或SEQ ID NO：4序列120bp处碱基多态位点对应基因型为GG基因型的罗非鱼为耐碱的莫桑比克罗非鱼。

2.一种检测权利要求1所述的与莫桑比克罗非鱼耐碱性相关的SNP标记的引物对或包含该引物对的试剂盒在耐碱莫桑比克罗非鱼亲本筛选或检测中的应用，其特征在于：

所述引物对的核苷酸序列如下所示：

引物1 ：5’- ACCTGCCAATCGTTACTCA -3’，SEQ ID NO：2；

引物2 ：5’- ACTGATTGGCTCTTCGCAA -3’，SEQ ID NO：3；

所述应用方法为：通过检测莫桑比克罗非鱼SNP标记对应的基因型，检测得到SEQ IDNO.1的序列1227bp处或SEQ ID NO：4序列120bp处碱基多态位点对应基因型为GG基因型的罗非鱼为耐碱的莫桑比克罗非鱼亲本。

3.根据权利要求2所述的引物对或试剂盒在耐碱莫桑比克罗非鱼亲本筛选或检测中的应用，其特征在于所述应用方法为：

提取莫桑比克罗非鱼DNA，采用SEQ ID NO：2序列和SEQ ID NO：3序列的引物对进行PCR扩增，选择具有SEQ ID NO：1序列的1227bp处碱基多态位点对应基因型为GG基因型或SEQID NO.4序列的120bp处碱基多态位点对应基因型为GG基因型的莫桑比克罗非鱼作为耐碱罗非鱼亲本。

4.根据权利要求3所述的引物对或试剂盒在耐碱莫桑比克罗非鱼亲本筛选或检测中的应用，其特征在于所述PCR扩增反应体系为25 µL的反应体系，具体如下：

H₂O 19.8µL；

10×PCR Buffer 2.5µL；

4×dNTP，10mmol/L 0.5µL；

Taq酶，5U/µL 0.2µL；

引物1 ，10µmol/L 0.5µL；

引物2 ，10µmol/L 0.5µL；

样本DNA 1.0µL。

5.根据权利要求4所述的引物对或试剂盒在耐碱莫桑比克罗非鱼亲本筛选或检测中的应用，其特征在于所述PCR扩增反应条件为：94℃预变性 2 min；94℃变性30 秒，56℃退火20 秒，72℃延伸30秒，32个循环；72℃延伸7 min。