[发明专利]一种糖尿病早期诊断多肽标志物及其应用

说明书

本发明涉及一种多肽标志物及其应用，属于生物技术领域。所述多肽标志物的氨基酸序列为氨基酸序列表中的SEQ ID No.1，还提供了一种氨基酸序列为氨基酸序列表中的SEQ ID No.2的多肽标志物。所述应用是指所述多肽标志物在制备糖尿病早期诊断试剂盒中的应用。本发明提出了定量肽类生物标志物作为临床糖尿病早期诊断的策略，获得了预防和监测糖尿病的相关指标，采用以敏感肽和内标肽段液相色谱质谱得到的肽段的峰面积或峰强度之比作为糖基化修饰程度指标，巧妙地解决了临床样品中存在较大个体差异，相对定量存在较大困难的问题，对于糖尿病的早期诊断和有效干预具有重大意义。

技术领域

本发明涉及一种多肽标志物及其应用，具体地说，涉及一种用于检测早期糖尿病的多肽标志物，属于生物技术领域。

背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一种由多种病因和发病机制引起的，体内胰岛素相对或绝对不足，进而导致体内糖、蛋白质和脂肪代谢紊乱，并以高血糖为主要临床表现的代谢性疾病。全世界90％的糖尿病患者患有2型糖尿病(Type 2Diabetes，T2D)，这是一种慢性的进行性代谢疾病。在2型糖尿病发病早期，机体通过增加胰岛素的分泌以维持血糖的正常水平，β-胰岛细胞处于超负荷的工作状态，长此以往将导致胰岛细胞的受损，形成“高血糖浓度-胰岛细胞受损-血糖升高”的恶性循环。多年后，当机体的补偿机制耗尽、胰岛细胞受到严重的不可逆损伤时，糖尿病的各种临床症状才会显现出来，而这时已经错过了合适的治疗时机。如何有效地诊断和防治糖尿病已经成为一个全球性的难题。

目前，糖尿病的诊断一直沿用1999年世界卫生组织(World HealthOrganization，WHO)规定的血糖水平升高标准。基于血糖浓度的诊断标准简单易行、容易推广，但血糖容易随着饮食、情绪等的影响而上下波动，并不能客观地反映体内葡萄糖的真正水平。

血液中的蛋白质可能与血糖发生糖基化反应，这些糖基化蛋白可能是潜在的糖尿病诊断生物标志物。2010年，美国糖尿病学会(ADA)批准糖化血红蛋白(HbA_1c)作为糖尿病新的诊断指标，能够反映出糖尿病患者2～3个月内的血糖水平，其结果更加稳定可靠，能够作为评价糖尿病患者长期血糖控制状况的金标准。糖化血清白蛋白(GA)水平可以反映患者近2～3周的平均血糖水平，不受临时血糖浓度波动的影响，具有一定的稳定性。然而，上述生物标志物也存在着一定的问题。在一些地中海贫血患病率较高的地区，当地人血红蛋白含量普遍偏低，HbA_1c的诊断价值有限。而HbA_1c和GA的检测结果也可能出现不一致的情况。目前，科学家正积极寻找其他更加可靠的糖尿病诊断标志物。1,5- 脱水葡萄糖醇(1,5-AG)是一种六碳链单糖，在血清中的浓度通常为 12μg/mL～40μg/mL，它能够反映患者1～2周的血糖情况，目前已经逐渐应用于临床。高敏感性C-反应蛋白(hs-CRP)被用于监测急性和慢性炎症反应状况，反映了多种糖尿病并发症的严重程度。在过去的研究中，丙氨酸转氨酶(ALT)，胱抑素(Cys-c)，甘油三酸酯和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)都被认为是反映糖尿病病情的生物指标。

高浓度的葡萄糖可以与血液中的蛋白质发生非酶催化的糖基化反应(Nonenzymatic Glycosylation，NEG)，也称为美拉德反应(Maillard reaction)，其总的反应历程由Hodge提出。美拉德反应可分为三个反应阶段：

第一阶段较为迅速，还原糖的羰基与赖氨酸的ε氨基、精氨酸的胍基或蛋白质游离氮端的自由氨基缩合形成可逆的早期产物希夫碱(Schiff bases)，随后热不稳定的Schiffbases发生阿玛多利(Amadori)重排反应，生成较为稳定的 Amadori产物1-氨基-1-脱氧-2-酮糖，为早期糖基化产物，其产量与葡萄糖浓度有关，是反应中的限速步骤；

第二阶段，由于pH值的不同，Amadori产物发生不同程度的降解；