[发明专利]一种Lt1Cas13d蛋白及基因编辑系统有效
申请号: | 202110325574.6 | 申请日: | 2021-03-26 |
公开(公告)号: | CN113234702B | 公开(公告)日: | 2023-02-10 |
发明(设计)人: | 谢红娴;程欢欢;黄龙;兰凯 | 申请(专利权)人: | 珠海舒桐医疗科技有限公司 |
主分类号: | C12N9/22 | 分类号: | C12N9/22;C12N15/55;C12N15/113;C12N15/70;C12N15/85;C12N1/21;C12N5/10 |
代理公司: | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人: | 汪青;周敏 |
地址: | 519013 广东省珠海*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 lt1cas13d 蛋白 基因 编辑 系统 | ||
1.一种VI-D型CRISPR/Cas13基因编辑系统,其特征在于:其包含Lt1Cas13d蛋白或者编码所述Lt1Cas13d蛋白的一种或多种多核苷酸,以及CRISPR RNA或转录所述CRISPR RNA的CRISPR Array,所述的Lt1Cas13d蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列,所述的CRISPR RNA的设计原则包括:
1)CRISPR RNA的间隔序列长度为9~30个碱基序列;
2)CRISPR RNA的间隔序列与目的基因的正义链反向互补;
3)CRISPR RNA的直接重复序列为36个碱基序列;
4)CRISPR RNA的直接重复序列包含2个茎环结构;
5)CRISPR RNA的间隔序列中间为seed区,与靶序列结合时不发生错配,
CRISPR Array转录得前体CRISPR RNA,前体CRISPR RNA剪切加工形成的CRISPR RNA,所述的CRISPR RNA作为向导RNA与Lt1Cas13d蛋白形成复合体,
所述的CRISPR Array包括多个与所述的Lt1Cas13d蛋白相匹配的直接重复序列以及间隔序列,所述的CRISPR Array的间隔序列包括靶序列,
所述的前体CRISPR RNA序列从5’到3’为:5’-直接重复序列-间隔序列-直接重复序列-3’,
所述的CRISPR Array的直接重复序列如SEQ ID NO:4所示,
所述的CRISPR Array的间隔序列还包括与Lt1Cas13d蛋白相关的元件,所述与Lt1Cas13d蛋白相关的元件的核苷酸序列如SEQ ID NO:5~11所示,
所述的基因编辑系统还包括辅助蛋白或编码所述的辅助蛋白的一种或多种核苷酸序列,所述的辅助蛋白包括Cas1蛋白和Cas2蛋白,
所述的Cas1蛋白具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列;
所述的Cas2蛋白具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的VI-D型CRISPR/Cas13基因编辑系统,其特征在于:所述的Lt1Cas13d蛋白为RNA核酸内切酶,所述Lt1Cas13d蛋白通过HEPN样核酸酶结构域切割与CRISPR RNA互补的单链RNA。
3.一种如权利要求1或2所述的VI-D型CRISPR/Cas13基因编辑系统在编辑原核生物或真核生物RNA方面的应用。
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