[发明专利]miR-29a作为标志物在制备恶性间皮瘤检测试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了miR‑29a作为生物标志物在制备恶性间皮瘤检测试剂盒中的应用，属于生物医学技术领域。所述miR‑29a核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，本发明首次公开miR‑29a与恶性间皮瘤的发病相关，以miR‑29a作为鉴别诊断恶性间皮瘤的生物标志物，将其应用到恶性间皮瘤的诊断试剂盒中具有重要的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及miR-29a作为生物标志物在制备恶性间皮瘤诊断试剂盒中的应用。

背景技术

恶性间皮瘤(MM)是一种发生于胸膜壁层或腹膜的职业性侵袭性恶性肿瘤，在石棉暴露后有长达20-40年的潜伏期。恶性间皮瘤是高度致死的，恶性间皮瘤受试者的总生存期非常低，中位生存期只有12个月，早期诊断比较困难并且对常规化疗和放疗反应不敏感。由于没有强制要求做组织学和影像学检查，许多病例可能简单地被误诊为其他癌症。因此，该病症的低发病率可能是报告率降低或诊断准确性限制的反映。

众所周知，由microRNA(miRNA，小RNA)介导的转录后修饰调控的多个基因参与了癌症的进展。因此，单个基因的表达可能并不能可靠地用于预测肿瘤的生物学过程。microRNA表达试验扩大了与关键的靶分子相关的多个靶向干扰的肿瘤生物学的研究范围，这可能是一个更好的恶性间皮瘤的研究策略，因为基因突变的多样性和通路失调是它侵袭性和耐药性的基础。因此，了解参与基因调控的miRNAs和下游信号转导的效应将为这些miRNAs开发成疾病的生物标志物提供机会，也将为调控靶向基因的生物学效应提供方法。建立基于每个病人特有的一系列miRNAs上调(致癌)和下调(抑癌)的特征将根据风险对新诊断的受试者进行分层，并为个性化治疗提供宝贵的工具。

研究证据支持miRNAs在恶性间皮瘤的分子生物学中发挥着越来越多的作用。例如，已有研究表明，miR-31具有抑制恶性间皮瘤细胞增殖、迁移、侵袭和生长的能力。另一研究发现在MeT-5A(恶性间皮瘤间皮细胞系)，H2452(恶性间皮瘤上皮细胞系)和MSTO-211H(恶性间皮瘤双向细胞系)中miR-205的异位表达导致ZEB1和ZEB2(间充质标记物)的表达显著减少和E-cadherin(上皮标志物)基因表达结果增加，同时也抑制了迁移和侵袭。miR-205的下调调控上皮细胞向间充质转化(EMT)与间充质表型和更强的侵袭行为显著相关。

因此，通过研究发现更多与恶性间皮瘤发病相关的miRNAs，作为恶性间皮瘤疾病诊断、治疗和预后评估的生物标志物，为疾病治疗提供有价值的信息，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供能够高灵敏度、特异性鉴别石棉相关疾病特别是恶性间皮瘤的生物标志物，将其应用于恶性间皮瘤疾病的诊断、治疗和预后评估。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明利用恶性间皮瘤组织样本构建小RNA文库进行测序，根据测序结果分析出癌组织与相邻正常组织之间的表达水平有显著差异的miRNA，发现miR-29a显著上调，进而在大样本量的组织和血浆样本中验证了miR-29a作为恶性间皮瘤诊断生物标志物的可行性。

本发明提供了核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的miR-29a作为生物标志物在制备恶性间皮瘤检测试剂盒中的应用。

所述检测试剂盒通过测定样本中miR-29a的表达水平来诊断恶性间皮瘤。miR-29a在恶性间皮瘤患者中高表达。

进一步的，所述检测试剂盒包括通过测序技术、核酸杂交技术、核酸扩增技术检测miR-29a表达的变化。

当测定样本为病理组织时，所述检测试剂盒中包含测定病理组织中miR-29a表达水平的试剂。