[发明专利]一种获得完整植物叶脉的方法

说明书

本发明提供一种获得完整植物叶脉的方法，包括以下步骤：配制成固定保存液A；离析叶片；去除叶片的被毛；将叶片转移至次氯酸钠溶液中；将叶片先放入质量浓度为31~35%的固定保存液A中处理10~30 min，再放入质量浓度为64~70%的固定保存液A中处理10~30min，最后放入固定保存液A中处理10~14h；染色；放入无水乙醇和二甲苯混合液中，然后将叶片转移至二甲苯中，待叶片透明，叶脉完全展露出来，自然晾干后切片保存；采用本发明获得的叶片的末端叶脉和游离导管可完整保留，适用于各种质地和毛被类型的叶片，不仅可以处理新鲜叶片，也可处理腊叶标本叶片，处理后得到的叶脉可做成切片永久保存。

技术领域

本发明属于植物生理生态学研究技术领域，具体涉及一种获得完整植物叶脉的方法。

背景技术

植物叶脉特征较为稳定，常作为重要分类性状应用于分类学领域。同时，植物叶脉具有运输水分、养分、矿物质以及支撑和保护叶片等生理生态功能。作为重要功能性状，由各级叶脉组成的叶脉网络特征能够反映植物的生态适应能力及生态适应对策。其中的末端叶脉和游离导管是决定叶片水分供需平衡的关键结构性状，对植物生长、水分运输、气体交换、光合作用等生理功能有重要影响。近年来，叶脉网络结构、功能（尤其是末端叶脉网络结构特性）及其生态学意义已成为植物生理生态学研究热点。

成功开展这方面研究的先决条件是获取清晰完整的叶脉网络，但由于受到叶片质地、表皮毛被等因素的影响，获取理想叶脉网络还很困难。目前，人们常根据叶片的质地、毛被等特点采用不同的叶片处理方法，大体上可以分为以下几类：（1）离析法，水煮软化或在水中发酵，化学药液如氢氧化钠溶液等离析，然后再用毛刷刷去表皮和叶肉；（2）化学透明法，化学药液如氢氧化钾溶液等浸泡离析或FAA固定液固定处理后，双氧水等漂白，再用梯度酒精溶液脱水处理；（3）混合法，化学药液浸泡离析或FAA固定液固定处理后，在二甲苯和丙酮混合液中用毛刷刷去表皮毛和叶肉。以上方法均存在一定缺陷，第一类方法会对末端叶脉、尤其是叶片盲脉和游离导管造成损坏；第二类方法无法有效清除表皮毛，梯度脱水处理程序繁琐，难以大量处理叶片样本；第三类方法在有毒药剂中去除表皮毛，在操作过程中挥发的有毒气体会对人体产生危害。此外，目前的方法还存在以下两方面的问题：其一，上述方法适宜处理质地较为厚硬的叶片或腊叶标本叶片。不适宜叶片薄、质地柔软、表皮毛被发达的叶片，在离析、去毛的过程中，末端叶脉会遭到破坏，难以获得完整叶脉；其二，上述方法往往是针对质地、表皮特性不同植物叶片分别设计的，而生态学研究往往涉及许多植物物种，且需要群体大量取样、不同发育时期动态取样。针对不同叶片类型采用不同处理方法，极为不便。同时，也因为方法的不统一，使得研究结果的可信度大大降低。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种获得完整植物叶脉的方法，叶片的末端叶脉和游离导管可完整保留，适用于各种质地和毛被类型的叶片，不仅可以处理新鲜叶片，也可处理腊叶标本叶片，处理后得到的叶脉可做成切片永久保存。

本发明为解决上述技术问题采用的技术方案是：一种获得完整植物叶脉的方法，包括以下步骤：

步骤一：按体积比96:4~94:6取无水乙醇和冰醋酸配制成固定保存液A；

步骤二：将采集的植物叶片用清水洗净，先用煮沸的水浸泡0~10 min，再放入质量浓度为4~6%的氢氧化钠溶液中离析，离析时间为3~7天，待叶片的叶肉大量析出后，转入蒸馏水中清洗；

步骤三：去除叶片的被毛，再放入蒸馏水中清洗；

步骤四：将步骤三中蒸馏水清洗后的叶片小心转移至质量浓度为2~4%的次氯酸钠溶液中，浸渍时间为25~35 min，待叶片完全变白，转移至蒸馏水中清洗；

步骤五：将固定保存液A和蒸馏水制备成质量浓度为31~35%的固定保存液A和质量浓度为64~70%的固定保存液A，将步骤四处理后的叶片先放入质量浓度为31~35%的固定保存液A中处理10~30 min，再放入质量浓度为64~70%的固定保存液A中处理10~30min，最后放入固定保存液A中处理10~14h；