[发明专利]DPA溶液相对荧光发射强度标准物质及其制备方法与应用

说明书

本发明公开一种DPA溶液相对荧光发射强度标准物质及其制备方法与应用。本发明提供的DPA溶液相对荧光发射强度标准物质可以提供在380‑450nm激发下，发射波长覆盖范围为400‑830nm，波长间隔为1nm的标准相对荧光发射强度值，可以很好地满足相关仪器红光及近红外波段的校准需求。本发明提供的DPA溶液相对荧光发射强度标准物质主要是作为量值传递的标准，满足目前研究和检测的需要，可用于荧光仪器(如光谱仪、分光光度计、酶标仪、基因扩增仪、免疫分析仪等)的检测器、检测模块的校准、分析方法评价，以及生物、食品、药品、化工产品及化妆品中的质量控制等方面。

技术领域

本发明属于分子荧光分析计量技术领域，具体涉及一种DPA溶液相对荧光发射强度标准物质及其制备方法与应用。

背景技术

在分子荧光分析计量领域，国内最为常用的是GBW(E)130290液相分析仪检定用溶液标准物质(萘-甲醇溶液)以及GBW(E)130100硫酸奎宁荧光标准物质。其中萘甲醇溶液仅可以标定一个激发波长及其对应发射波长，进行波长校准。而GBW(E)130100硫酸奎宁荧光标准物质在350nm的可见光激发下，硫酸奎宁的硫酸溶液的最大发光位置在偏蓝绿色的450nm处(相对发射强度标准值1.000)，且发光效率仅为55％。而在395nm以下或是在565nm以上，其发光亮度的标准值已经在0.1以下，带来了很大的不确定度。由于上述性质的限制，硫酸奎宁标准物质在一些生物体系，特别是荧光标志物的免疫分析上无能为力，主要原因是由于许多生物体及其组织的自发荧光处于紫外和可见光区域，如血浆中血清蛋白的发射荧光波长范围在(325～350)nm的紫外光区域，而同时红光及近红外光(600-1200)nm的应用需求越来越大，对于375nm以下或675nm以上的波段硫酸奎宁荧光标准溶液已经远远无法满足要求。

国外主要有NIST研制的一系列荧光校准用标准物质(Relative IntensityCorrection Standard for Fluorescence Spectroscopy)，编号为SRM2940～2944，5种标准物质提供了覆盖了从紫外到近红外波长范围(320～830nm)，每隔1nm的RelativeCorrected Emission Intensity(校准相对发射强度)量值，具有广泛的应用前景，很好地满足了红光及近红外波段的校准需求。但国内仍旧欠缺相关标准物质。

DPA，IUPAC命名为：6-[4-(二苯基氨基)苯基]香豆素-3-羧酸乙酯，CAS号为1056693-13-0，是一类香豆素衍生物。香豆素又称为香豆精，是具有苯骈α-吡喃酮母核的一类化合物的总称，在结构上可看作顺式邻羟基桂皮酸失水而成的内酯。低浓度可刺激植物发芽和生长作用，高浓度则抑制。香豆素类化合物还具有光敏作用、抗菌作用、抗病毒作用、平滑肌松弛作用及抗凝血作用，是一类常见的口服抗凝药物。与此同时，香豆素类化合物还是常见的荧光试剂，作为荧光染料及色素应用广泛，在外接了D-π-A类取代基时，具有良好的光致发光性能。目前尚无香豆素类或其余类别荧光染料标准物质。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种DPA溶液相对荧光发射强度标准物质，在380-450nm的激发光照射下，其发射波长覆盖范围为(400-830)nm，波长间隔为1nm，可以很好地满足相关仪器红光及近红外波段的校准需求。本发明提供的相对荧光发射强度标准物质主要是作为量值传递的标准，满足目前研究和检测的需要，可用于荧光仪器(如光谱仪、分光光度计、酶标仪、基因扩增仪、免疫分析仪等)的检测器、检测模块的校准、分析方法评价，以及生物、食品、药品、化工产品及化妆品中的质量控制等方面。

根据本发明的一个方面，提供了一种DPA溶液相对荧光发射强度标准物质，该DPA溶液相对荧光发射强度标准物质可提供在380-450nm激发下，发射波长覆盖范围为400-830nm，波长间隔为1nm的标准相对荧光发射强度值。