[发明专利]罗丹明B溶液相对荧光发射强度标准物质及其制备方法与应用

说明书

本发明公开一种罗丹明B溶液相对荧光发射强度标准物质及其制备方法与应用。本发明提供的罗丹明B溶液相对荧光发射强度标准物质可以提供在500‑630nm激发下，发射波长覆盖范围为520‑830nm，波长间隔为1nm的标准相对荧光发射强度值，可以很好地满足相关仪器红光及近红外波段的校准需求。本发明提供的罗丹明B溶液相对荧光发射强度标准物质主要是作为量值传递的标准，满足目前研究和检测的需要，可用于荧光仪器(如光谱仪、分光光度计、酶标仪、基因扩增仪、免疫分析仪等)的检测器、检测模块的校准、分析方法评价，以及生物、食品、药品、化工产品及化妆品中的质量控制等方面。

技术领域

本发明属于分子荧光分析计量技术领域，具体涉及一种罗丹明B溶液相对荧光发射强度标准物质及其制备方法与应用。

背景技术

荧光光谱仪/荧光分光光度计是光谱分析工作中一种重要且有效的分析仪器，荧光检测具有灵敏度高、选择性强、试样量少、无损检测和方法简便等优点。光谱分析不仅在基础研究中是一门重要的学科，在工、农、医、环保、商检、安全和国防等领域也有很多应用。近年荧光光谱的新技术、新器件、新工艺不断涌现，应用面越来越大。光致发光、电致发光、场致发光、激光光谱、时间分辨光谱等方法不断改进完善。而荧光光谱仪的波长校准及相对强度校准是这一切分析和应用的基础。

目前JJG 537-2006《荧光分光光度计检定规程》规定了荧光分光光度计的计量性能要求，包括了波长示值误差与重复性、检出极限、测量线性、荧光光谱峰值强度重复性及稳定性。其中在仪器波长的示值误差与重复性的检定时，采用氙灯/汞灯的谱线，利用其特征原子谱线作为波长标定，或是采用萘-甲醇标准物质，通过测定其最大激发波长290nm及其最大发射波长331nm作为波长标定。而在测定检出极限及荧光光谱峰值强度重复性时，选用的GBW(E)130100硫酸奎宁荧光标准物质的最大激发波长350nm，最大发射波长为450nm，覆盖波长范围为(375～675)nm。

在实际检定校准工作中，近年来遇到较多关于每个波长下发光强度的精确校准需求。然而萘-甲醇标准物质仅仅适用于波长的校准，而对于GBW(E)130100硫酸奎宁荧光标准物质在395nm以下或是在565nm以上，其发光亮度的标准值已经在0.1以下，带来了很大的不确定度，而且标准值的波长间隔长达5nm，限制了其更为精细的应用。由于上述性质的限制，硫酸奎宁标准物质在一些生物体系，特别是荧光标志物的免疫分析上无能为力，主要原因是由于许多生物体及其组织的自发荧光处于紫外和可见光区域，而红光、近红外光的应用需求越来越大，硫酸奎宁荧光标准溶液已经远远无法满足要求。目前NIST(美国国家标准与技术研究院，National Institute ofStandards and Technology)开发了波长间隔为1nm的标准物质SRM2944替代了同为硫酸奎宁成分的标准物质SRM936，在330.8nm的激发光照射下，其发射波长覆盖范围为(350～640)nm；还开发了适用于红光波段的标准物质SRM2944，在515nm的激发光照射下，其发射波长覆盖范围为(530～830)nm，波长间隔为1nm，这很好地满足了红光及近红外波段的校准需求。但国内仍旧欠缺相关标准物质。

罗丹明B，IUPAC命名为：[9-(2-羧基苯基)-6-二乙氨基-3-亚戊基]-二乙基氯化铵，CAS号为81-88-9。是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。易溶于水、乙醇，微溶于丙酮、氯仿、盐酸和氢氧化钠溶液。水溶液为蓝红色，稀释后有强烈荧光，醇溶液为红色荧光。常用作实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。目前国内有关罗丹明B标准物质，有GBW(E)100371罗丹明B纯度标准物质及GBW(E)100374罗丹明B溶液标准物质，其量值是纯度和浓度，未涉及有相对荧光发射强度。

发明内容