[发明专利]骨肉瘤早期筛查与检测方法、血清蛋白标志物、试剂盒

说明书

本发明属于生物医学技术领域，公开了一种骨肉瘤早期筛查与检测方法、血清蛋白标志物、试剂盒，对用于骨肉瘤早期筛查和诊断的联合检测血清蛋白标志物进行包被，封闭后清洗；与待检测血清进行一抗孵育，清洗，再进行二抗孵育，再清洗；待显色系统显色后终止反应，测定吸光度值；以OD₄₀₅为相对OD值，去除空白对照，基于各个指标的吸光度值计算预测概率P值大小；得到骨肉瘤早期筛查与检测结果。本发明的骨肉瘤早期筛查和诊断试剂盒包含ENO1、GAPDH和TPI1共3种蛋白，可用于骨肉瘤的早期筛查和诊断，检测方法灵敏度高、特异性强、成本低，且操作简单、快捷，可为骨肉瘤的早期筛查提供依据。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种骨肉瘤早期筛查与检测方法、血清蛋白标志物、试剂盒。

背景技术

目前，骨肉瘤(Osteosarcoma，OS)，恶性成骨细胞产生的骨样组织，是由原始骨形成间充质细胞产生的最常见的高度恶性的原发性骨肿瘤。并且由于初始症状不具有特异性且发病隐匿，组织损伤或创伤不明显，通常会被忽视而误诊，造成致命的结果。手术切除和化学药物治疗等治疗方式是骨肉瘤的治疗手段，但是疾病最初的症状往往特异性很不显著，且起病隐匿，患者通常对此不会太在意。大多数OS都是在疾病处于相对较晚期时才被诊断出来，此时疾病的恶性特征会非常明显。临床症状、影像学表现和组织样本活检是很多医师进行OS诊断时的检查方式。OS早期症状不明显，且影像学检查往往会被忽略，而组织样本活检具有创伤性，且对患者而言有一定的经济负担，诊断的准确性因样本取材的不同和观察者的不同而有差别，从而造成临床预测价值不明确。此外，活检取材的操作不当是造成误诊、截肢和局部复发的常见原因，并且也会降低生存率。而现今OS的生物学标志物在诊断早期恶性肿瘤、指导个体化治疗的干预和预测疾病结局方面的应用和临床证据方面仍然不充分。国内外研究者们在骨肉瘤肿瘤标志物层面进行了大量研究，致力于为骨肉瘤的分子诊断以及术后个体化治疗方案的制定等提供重要的理论依据。

近年来，在人类肿瘤学的研究领域内，许多研究已经发现肿瘤患者血清中含有一组独特的诱发自身抗体反应的细胞蛋白，被称为肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigen，TAA)，其诱导产生的抗体称为抗TAA-自身抗体(autoantibody)。诱导这些自身抗体反应的细胞蛋白的类型多种多样。很多靶向抗原均为细胞蛋白，如P53，其异常调节或过度表达均会导致肿瘤。对于mRNA结合蛋白p62而言，其被称为成人组织中缺失的甲胎蛋白，在肿瘤细胞中免疫原性会导致p62的异常表达。某些肿瘤患者的免疫系统具有感知这些自身抗原异常的能力，并相应产生自身抗体。研究表明，使用多种TAAs组合可以大大提高自身抗体的检测效率。譬如，由14种全长的重组蛋白组成的微阵列，是由cDNAs编码，包括survivin、CAPERα、RalA、p62、Koc、MDM2、cyclin B1、p53、14-3-3ζ、p90、IMP1、c-Myc、NPM1和p16，并且专门用于检测HCC。这14种自身抗体的频率存在波动，在HCC其波动范围是5.6％-21.1％。然而，随着不断累加自身抗体的个数，最后当数量达到了14个时在HCC阳性抗体反应率逐步增加到了69.7％。事实上，对任何单个抗原的自身抗体，如抗-p53、抗-p62或者抗-c-Myc的灵敏度水平尚不能用于肿瘤的常规诊断。这些数据说明多个TAAs组合后可能会使肿瘤的血清学诊断的灵敏度更高。另一方面，这些数据也说明了在选择不同的TAA-抗体系统时，有些TAAs或许会对某些特定类型的肿瘤更具特异性。使用特制的TAA组合可以识别鉴定出特定的自体抗体图谱，从而对不同类型的肿瘤进行鉴别诊断，这是一种有应用潜力的肿瘤筛查方法。