[发明专利]特异性结合PDL1的多肽及其用途

说明书

本发明提供特异性结合PDL1的多肽及其用途。具体而言，本发明涉及一种能特异性结合PDL1的多肽或其活性片段，以及包含该多肽或其活性片段的融合蛋白。本发明还提供了能够表达该融合蛋白的CAR‑T细胞，利用CAR‑T细胞特异性地杀伤肿瘤细胞，例如肺癌、多发性骨髓瘤或急性髓细胞性白血病。本发明的CAR‑T可作为肿瘤类疾病的治疗药物，为肿瘤的预防和治疗提供了新的方法。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及特异性结合PDL1的多肽及其制备和应用。

背景技术

T细胞是淋巴细胞的一种，在细胞介导的免疫性中起重要作用。其与其他淋巴细胞(诸如B细胞及自然杀手细胞(NK细胞))的区别在于细胞表面上存在T细胞受体(TCR)。T辅助细胞，亦称为CD4⁺T或CD4 T细胞，在其表面上表达CD4糖蛋白。辅助T细胞在暴露于由MHC(主要组织相容复合体)II类分子呈递之肽抗原时活化。一旦活化，此类细胞快速增殖且分泌可调节免疫反应的细胞因子。细胞毒性T细胞，亦称为CD8⁺T细胞或CD8T细胞，在细胞表面上表达CD8糖蛋白。CD8⁺T细胞在暴露于由MHC I类分子呈递的肽抗原时活化。记忆T细胞是一T细胞亚群，长期存在且响应于相关抗原，因此向免疫系统提供针对过去感染和/或肿瘤细胞的记忆。

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，缩写CAR)修饰的T细胞即为CAR-T，是在体外培养条件下使用遗传工程手段修饰T细胞，使其表达外源性抗肿瘤的基因。CAR基因为人工设计的基因片段，其编码蛋白主要包括细胞外识别域和细胞内信号转导结构域：前者为特异性抗体片段，用于靶向识别肿瘤表面特异性分子；后者用于启动特异性识别后的免疫细胞应答，发挥细胞免疫作用。经基因改造后，T细胞可在其表面产生嵌合抗原受体。CAR为允许T细胞识别肿瘤细胞上的特定蛋白(抗原)的蛋白。经基因工程改造的CAR T细胞能实验室中生长直至其数目达到数十亿。然后可将扩增的CART细胞输注至患者中。

细胞程式死亡配体1(Programmed cell death 1ligand 1，PDL1)具有IgV和IgC样区、跨膜区及细胞质尾部，其中细胞质尾区与细胞内的信号转导相关，IgV和IgC则参与细胞间的信号转导。PDL1与其T细胞上的受体PD1相互作用，在免疫应答的负性调控方面发挥着重要作用；该分子具有广泛的组织表达谱，在一些肿瘤细胞系上有较高的表达，许多研究均表明其与肿瘤的免疫逃逸机制相关。肿瘤部分的微环境可诱导肿瘤细胞上的PDL1的表达，且表达广泛，表达的PDL1有利于肿瘤的发生和生长，诱导抗肿瘤T细胞的凋亡。

PD1与PDL1结合后，传递抑制性信号，能够抑制淋巴细胞的增殖和活性、抑制CD4⁺T细胞向Th1和Th17细胞分化、抑制炎性细胞因子的释放，这些都起到了免疫负调控的作用。在正常情况下，PDL1和PD1的结合能够通过上述的作用，维持外周淋巴细胞对自身抗原的免疫耐受，从而防止自身免疫性疾病的发生。但在肿瘤的发生发展中，肿瘤细胞表达的PDL1与PD1结合后却能通过对淋巴细胞的抑制性作用，从而促进肿瘤的免疫逃逸。

发明内容

有鉴于此，本发明提供特异性结合PDL1的多肽及其用途。具体而言，本发明涉及一种能特异性结合PDL1的多肽或其活性片段，以及包含该多肽或其活性片段的融合蛋白。本发明还提供了能够表达该融合蛋白的CAR-T细胞，利用CAR-T细胞特异性地杀伤肿瘤细胞，例如多发性骨髓瘤或急性髓细胞性白血病。本发明的CAR-T可作为肿瘤类疾病的治疗药物，为肿瘤的预防和治疗提供了新的方法。

具体而言，本发明提供了一种能结合PDL1的多肽或其活性片段，其中所述多肽具有SQGINHLRGVLQSSG(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列或所述氨基酸序列的变体序列，其中所述变体序列具有与SEQ ID NO：1至少80、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。