[发明专利]一种F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒及其制备方法

说明书

本发明涉及一种F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，其载体骨架为野生型血清4型禽腺病毒SD株；本发明所述的一种基于CRISPR‑Cas9技术的F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒的构建及其应用，选择当下流行的血清4型禽腺病毒作为骨架，通过银染、质谱和免疫共沉淀等技术发现并鉴定FAdV‑4中F2基因与宿主蛋白互作的功能区，随后将功能区删除后成功获得了F2部分缺失型重组FAdV‑4病毒，在体内及体外实验结果均显示，FA4‑Del重组病毒毒力显著降低，能够为SPF鸡提供很好的免疫保护。

技术领域

本发明涉及一种基于CRISPR-Cas9技术的F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，属于基因工程技术领域。

背景技术

禽腺病毒(Fowl Adenovirus，FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属，分为5个种(A-E)，12个血清型。虽然在世界各地均有报道，FAdV感染一般引起亚临床状况，而急性感染主要引起包涵体肝炎、心包积液以及肌胃糜烂等。自2013年，国内鸡群由FAdV引起的包涵体肝炎、心包积液病例逐渐增多。到2015年，FAdV 感染在国内多个省份鸡群爆发。目前FAdV爆发不仅发生在3-4周龄肉鸡，还发生于10-20周龄的蛋鸡，给国内养鸡业造成了严重经济损失。病毒分离鉴定发现，目前高致病性4型FAdV在国内鸡群流行较广泛。然目前尚无FAdV-4的疫苗。

之前有研究报道FAdV-4的毒力与F2基因密切相关，因此，本发明利用抗 F2的单克隆抗体，通过银染、质谱和免疫共沉淀等技术发现并鉴定了FAdV-4中 F2基因与宿主蛋白互作的功能区。

随着近年来基因编辑技术的快速发展，CRISPR-Cas9技术的应用也越来越广泛。本发明前期通过CRISPR-Cas9技术获得重组病毒FAdV4-EGFP的基础上，随后再次利用CRISPR-Cas9技术对F2基因进行编辑，之后进行反向筛选，获得缺失F2互作功能区的重组禽腺病毒，在体内及体外实验结果均显示，FA4-Del重组病毒毒力显著降低，且对SPF鸡攻毒后的保护率达到100％。

发明内容

本发明的目的在于针对上述问题，提供一种基于CRISPR-Cas9技术的F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，以及该重组病毒在临床中的应用。本发明的原理和最核心的关键技术是鉴定F2的相关功能区，随后利用基因编辑技术对该功能区进行删除，纯化后获得高纯度的致弱的F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒。

本发明的目的是这样实现的，

一种F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒，其特征在于，其载体骨架为野生型血清4型禽腺病毒SD株；

所述的F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒，是在FAdV4-EGFP重组病毒的基础上，通过CRISPR-Cas9技术对F2基因进行编辑获得，其中全长F2基因后其序列如SEQ ID NO.1所示；

SEQ ID NO.1为：