[发明专利]一种基于杂合生物膜的核黄素电化学检测方法及传感器

权利要求书

1.一种基于杂合生物膜的核黄素电化学检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)将希瓦氏菌种接种至培养基活化后加入到含有反应缓冲溶液的容器中；

步骤(2)在所述步骤(1)的容器中加入无菌FeCl₃溶液静置后再加入无菌Na₂S₂O₃溶液；

步骤(3)将参比电极、工作电极、对电极安装在所述容器中形成三电极系统，所述工作电极在杂合细胞合成前安装在容器中，使得杂合细胞合成的同时在工作电极表面形成生物膜，形成生物膜后直接使用或将工作电极在厌氧环境中转移至新容器中使用；

步骤(4)在合成时间大于5h，合成温度为4-37℃的合成条件下，希瓦氏菌生成具有导电性的FeS纳米颗粒并覆盖于细胞表面形成电活性杂合细胞，所述电活性杂合细胞吸附于所述步骤(3)的工作电极上形成电活性杂合细胞生物膜，将所述三电极系统连接信号检测系统，形成生物电化学传感器；

步骤(5)在所述步骤(4)得到的生物电化学传感器的工作电极上加载外电压，向所述容器中加入希瓦氏菌的电子受体，然后再加入核黄素样品，检测并记录电流变化值。

2.根据权利要求1所述的基于杂合生物膜的核黄素电化学检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中活化的希瓦氏菌加入到反应缓冲溶液中OD₆₀₀值控制在0.05-5。

3.根据权利要求1所述的基于杂合生物膜的核黄素电化学检测方法，其特征在于，所述步骤(1)到步骤(3)中实验操作均应在厌氧环境下进行，且容器在杂合细胞生物膜的合成和核黄素检测过程中均保持厌氧状态。

4.根据权利要求1所述的基于杂合生物膜的核黄素电化学检测方法，其特征在于，所述步骤(5)中希瓦氏菌的电子受体为富马酸钠溶液。

5.根据权利要求1所述的基于杂合生物膜的核黄素电化学检测方法，其特征在于，所述步骤(5)中在工作电极上施加负电压，平衡后，加入富马酸钠作为电子受体，基线平衡后，添加核黄素进行检测。

6.一种根据权利要求1-5任意一项所述基于杂合生物膜的核黄素电化学检测方法的传感器，其特征在于，所述传感器包括信号检测系统、三电极系统和信号发生系统；所述信号发生系统包括希瓦氏菌的电子受体、电活性杂合细胞生物膜和反应缓冲溶液。

7.根据权利要求6所述的基于杂合生物膜的核黄素电化学检测方法的传感器，其特征在于，所述希瓦氏菌的电子受体为富马酸钠溶液。