[发明专利]一种新冠病毒胶体金检测试纸及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种新冠病毒胶体金检测试纸及其制备方法和应用，本发明的试剂盒检测阳性符合率高。金标记结合物垫分别采用新冠病毒的S蛋白和N蛋白进行标记，可同时识别样本中针对新冠病毒S蛋白的IgM抗体和IgG抗体，以及新冠病毒N蛋白的IgM抗体和IgG抗体，同时本发明对S蛋白金标记PH值为7.5±0.5，且金标记S蛋白是均匀的铺在结合物垫上；对N蛋白金标记PH值为9.5±0.5，且金标记N蛋白采用喷金划膜仪喷在结合物垫上；以及通过对S蛋白和N蛋白进行差异化的金标记和处理方式和采用球形瓶与数显夹套式磁力搅拌器进行胶体金颗粒的烧制、并在缓冲溶液1、缓冲溶液2中加入表面活性剂月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠能够大幅提高检测灵敏度，使得整体的检测效率提高。

技术领域

本发明属于新冠病毒检测技术领域，具体来说是一种新冠病毒胶体金检测试纸及其制备方法和应用。

背景技术

严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)属于冠状病毒(Coronavirus)，是引起2019冠状病毒病疫情的病原体。冠状病毒是一类在动物与人类之间传播的人畜共患的单链RNA病毒，冠状病毒可感染哺乳动物、鸟类，引起牛和猪的消化道疾病或鸡的上呼吸道疾病。在SARS-CoV-2发现之前，自然界常见，已知可感染人类的冠状病毒共有六种，低危型的有4种，主要引起感冒症状，它们分别是人类冠状病毒229E(HCoV-229E)、人类冠状病毒OC43(HCoV-OC43)、人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63)、人类冠状病毒HKU1(HCoV-HKU1)；高危型有2种，严重急性呼吸系统综合症冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合症冠状病毒(MERS-CoV)。目前较多的试剂盒基于新型冠状病毒、甲型和乙流流感病毒抗体检测，但人体产生特异性抗体需要7-14天，抗体检测相对于抗原检测具有时间滞后性，不能及时发现、及时隔离和治疗；基于病毒核酸检测的试剂盒，操作相对繁琐、耗时较长，而且需要使用扩增仪且需要专业人员操作等缺点，现有的金标试纸在使用的过程中检测的阳性符合率低。

发明内容

本发明的目的在于解决现有的一种新冠病毒胶体金检测试纸及其制备方法和应用，以解决新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金检测试纸检测时的阳性符合率低的问题。

为达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

一种新冠病毒IgM和IgG抗体胶体金检测试纸的制备方法，包括如下步骤：

S10、利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液；

S20、制备金标记S蛋白和N蛋白：利用碳酸钾分别将制备好的胶体金溶液调节PH至7.5±0.5和9.5±0.5，以分别形成胶体金溶液A和胶体金溶液B，分别再用双蒸水稀释标记S蛋白和N蛋白至浓度为0.5-2mg/ml，然后将S蛋白逐滴加入搅拌的胶体金A溶液中，N蛋白逐滴加入搅拌的胶体金B溶液中，保持搅拌20-30min，分别胶体金A溶液和胶体金B溶液中加10％BSA至终浓度为0.2％-0.5％，封闭裸露金颗粒，4℃下继续搅拌20-30min，并以6000r/min离心20-30min，浓缩备用；

S30、利用缓冲溶液1稀释浓缩S20中的金标记S蛋白，并均匀铺在金标结合物垫上以形成金标S蛋白结合物垫；利用缓冲溶液2处理金标结合物垫后并将S20中的金标记N蛋白喷于处理好的金标结合物垫上以形成金标N蛋白结合物垫；

S40、将抗人IgM、抗人IgG和羊抗兔分别用缓冲溶液3稀释，然后将抗人IgM、抗人IgG和羊抗兔包被于硝酸纤维素膜上以分别形成第一检测线、第二检测线和质控线，37℃干燥16小时备用；

S50、利用缓冲溶液4浸泡样品垫，在室温、湿度＜20％的条件下过夜干燥，切割备用；

S60、按样品垫、金标S蛋白结合物垫、金标N蛋白结合物垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺序粘附于支撑底板上组装试纸，并切割包装。。