[发明专利]表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白重组血清4型禽腺病毒以及制备方法

说明书

本发明涉及表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，发明的原理和最核心的关键技术是利用sgRNA，替换EGFP后进行病毒纯化，获得可以稳定扩增血清8型禽腺病的纤突蛋白的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入的血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F，成功获得了表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白的重组FAdV‑4，在体外实验结果显示，FAdV4‑F1‑F‑F2重组病毒与FAdV‑4野毒的复制能力几乎相同，可作为防控FAdV‑4和FAdV‑8的灭活重组多价苗。

技术领域

本发明涉及一种表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白重组血清4型禽腺病毒以及制备方法，属于基因工程技术领域。

背景技术

禽腺病毒(Fowl Adenovirus，FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属，分为5个种(A-E)，12个血清型(FAdV-1～8a,FAdV-8b～11)。虽然在世界各地均有报道，FAdV感染一般引起亚临床状况，而急性感染主要引起包涵体肝炎、心包积液以及肌胃糜烂等。自2013年，国内鸡群由FAdVs引起的包涵体肝炎、心包积液综合征的病例逐渐增多。到2015年，FAdV感染在国内多个省份鸡群爆发。目前FAdV爆发不仅发生在3-4周龄肉鸡，还发生于10-20周龄的蛋鸡，给国内养鸡业造成了严重经济损失。病毒分离鉴定发现，心包积液综合征主要是由高致病性FAdV-4引起的，而FAdV-8是包涵体肝炎的主要病因。然目前尚无FAdV-4和FAdV-8的商品化疫苗。为此开发一种高效、优质的二价疫苗显得尤为重要。疫苗种类的主要分为灭活疫苗、弱毒活疫苗和基因工程疫苗。而腺病毒作为开发多价苗的病毒载体在许多文献中也有报道，因此，本发明利用本实验室已开发的重组的FAdV4-EGFP病毒作为载体插入血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因(F)，成功获得了重组的FAdV4-F1-F-F2病毒，旨在防制FAdV-4和FAdV-8，为构建FAdV-4重组多价苗提供了坚实的理论基础。

发明内容

本发明的目的在于针对上述问题，一种表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白重组血清4型禽腺病毒以及制备方法，发明的原理和最核心的关键技术是利用sgRNA，替换EGFP后进行病毒纯化，获得可以稳定扩增血清8型禽腺病的纤突蛋白的重组禽腺病毒。

本发明的目的是这样实现的，一种血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因重组血清4型禽腺病毒，其特征在于，其载体为重组EGFP血清4型禽腺病毒FAdV-4-EGFP。

所述重组血清4型禽腺病毒的外源基因为血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F，其序列如SEQ ID NO.1所示；

SEQ ID NO.1为：