[发明专利]一种骨髓肽的提取制备方法在审
| 申请号： | 202110336890.3 | 申请日： | 2021-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN113004369A | 公开（公告）日： | 2021-06-22 |
| 发明（设计）人： | 李洪景;刘洋;崔孟龙;仇志烨;宋天喜;朱艳泽;胡艳丽;何志敏;崔云;李良才;朱金亮 | 申请（专利权）人： | 潍坊奥精医学研究有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/34 | 分类号： | C07K1/34;C07K1/14 |
| 代理公司： | 青岛致嘉知识产权代理事务所(普通合伙) 37236 | 代理人： | 李淑花 |
| 地址： | 261200 山东省潍*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 骨髓 提取 制备 方法 | ||
1.一种骨髓肽的提取制备方法，其特征在于：包括如下步骤:
步骤1：取新鲜干净的哺乳动物骨头并去其肉及结缔组织，放置在装有75%酒精的培养皿中浸泡3-5小时；
步骤2：通过装有已配好RPMI-1640 细胞培养基溶液的注射器插入骨髓腔内，将骨髓腔内的骨髓冲入到离心器皿中；
步骤3：将步骤2处理得到的溶液在36℃-38℃的恒温中水浴通过超声波处理以破碎细胞；
步骤4：将步骤3处理得到的溶液4000-4500rpm离心5min，去上清液；
步骤5：将步骤4处理得到的溶液加入红细胞裂解液，静置8-10小时，加入无菌的PBS缓冲液，该红细胞裂解液与PBS缓冲液的比例为1：9；
步骤6：将步骤5的混合液通过不同规格超滤膜的超滤器从大往小下进行连续分级梯度超滤，然后采用纳滤浓缩技术制得浓缩原料液；
步骤7：根据不同浓度的需要，制出骨髓肽的不同制剂。
2.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法，其特征在于：步骤1中还包括对取出的骨通过有机溶剂萃取分离油脂。
3.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法，其特征在于：步骤2至步骤7的过程与装置都在无菌的环境下操作。
4.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法，其特征在于：将骨髓分散到3-5倍骨髓重量的水中在36℃-38℃的恒温水浴中通过超声处理使骨髓细胞破裂，超声频率为100KHz -200KHz。
5.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法，其特征在于：红细胞裂解液为取3.735g氯化铵、三羟甲基氨基甲烷（Tris）1.3g加水溶解并稀释至500ml，0.22μm滤膜过滤除菌，4℃保存制得。
6.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法，其特征在于：PBS缓冲液为含0.05%吐温-20的pH7.4的磷酸盐缓冲液。
7.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法，其特征在于：通过不同规格超滤膜的超滤器留分子量6000或10000左右的物质。
8.根据权利要求1所述的骨髓肽的提取制备方法，其特征在于：将制得的浓缩原料液通过真空喷雾干燥得到骨肽，喷雾干燥时，进风温度控制在140-150℃，出风温度控制在70-75℃。
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