[发明专利]一种用于重组表达糖化酶的构建物及其应用

权利要求书

1.一种用于重组表达糖化酶的构建物，其特征在于，所述构建物从5'至3'端依次包括启动子，编码糖化酶的核苷酸序列，终止子；

所述启动子选自ADH1p、ENO1p、PDC1p、HXT7p、FBA1p、PGK1p和TDH3p中的一种或两种以上；

所述终止子选自TDH3t和CYC1t中的一种或两种。

2.根据权利要求1所述的构建物，其特征在于，所述启动子为ENO1p、ADH1p、HXT7p、PDC1p中的一种或两种以上，优选地，所述启动子为HXT7p。

3.根据权利要求1或2所述的构建物，其特征在于，所述编码糖化酶的核苷酸序列编码得到的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示；

优选地，所述编码糖化酶的核苷酸序列为SEQ ID NO.2。

4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包含权利要求1-3任意一项所述的构建物；

优选地，所述载体中含有单拷贝、双拷贝或多拷贝的权利要求1-4任意一项所述的构建物。

5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的结构为：

p1-GLU-t1-p2-GLU-t2-delta5'-pUCori-CEN6/ARS-delta3'-loxP-TEF1p-KanMX-TEF1t-loxP，其中，

所述GLU为SEQ ID NO.2中的一个或两个以上的拷贝；

p1和p2为启动子，所述p1或p2选自ADH1p、ENO1p、PDC1p、HXT7p、FBA1p、PGK1p和TDH3p中的一种或两种以上；

t1和t2为终止子，所述t1或t2选自TDH3t和CYC1t两个终止子中的一种或两种；

TEF1p-KanMX-TEF1t为卡那霉素/G418抗性基因表达片段；

delta5'、delta3'为delta片段；

pUCori-CEN6/ARS为复制子序列；

loxP为抗性消除识别位点。

6.一种重组酵母，其特征在于，所述重组酵母细胞中含有权利要求4或5所述的表达载体或整合有权利要求1-3任意一项所述的构建物。

7.根据权利要求6所述的重组酵母，其特征在于，所述重组酵母的宿主酵母细胞为安琪高酒酵母YY(Saccharomyces cerevisiae高酒酵母YY)，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 2021171。

8.根据权利要求6或7所述的重组酵母，其特征在于，所述重组酵母为酿酒酵母YY-HXT7-1(Saccharomyces cerevisiae YY-HXT7-1)，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 20191127。

9.酿酒酵母YY-HXT7-1(Saccharomyces cerevisiae YY-HXT7-1)，其保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 20191127。

10.权利要求6-8任意一项所述的重组酵母或权利要求9所述的酿酒酵母YY-HXT7-1(Saccharomyces cerevisiae YY-HXT7-1)的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

将权利要求4或5所述的表达载体转化到宿主酵母细胞中或将权利要求1-3任意一项所述的构建物整合到宿主酵母细胞的染色体基因组中。

11.根据权利要求10所述的重组酵母的制备方法，其特征在于，将所述的表达载体转化到宿主酵母细胞中包括以下步骤：

将权利要求4或5所述的表达载体转化到宿主酵母细胞中，消除抗性基因，得到所述重组酵母。