[发明专利]NK细胞冻存液及其制备方法和应用

说明书

本发明是关于一种NK细胞冻存液及其制备方法和应用，所述NK细胞冻存液由0.9％氯化钠注射液、人血白蛋白、甘油、维生素C和海藻糖组成。以上这几种组分的共同作用可以促进NK细胞的增殖，提高NK细胞的活力，大大提高了NK细胞复苏后的活率；该NK细胞冻存液不含二甲基亚砜和除人体以外的动物源成分，具有高复苏率，成分简单，稳定性好等优点。所述NK细胞冻存液用于冻存NK细胞，经过冻存之后，NK细胞的活率不会发生明显变化，且使用所述NK细胞冻存液冻存之后的NK细胞可以经过融化后直接输入人体，方便快捷高效，无安全风险。

技术领域

本发明涉及细胞冻存技术领域，特别是涉及一种NK细胞冻存液及其制备方法和应用。

背景技术

NK细胞(Natural killer cells)是人体防御肿瘤的第一道防线，在固有免疫系统具有重要的作用，不需要提前致敏就可以对肿瘤细胞进行直接杀伤。虽然现在NK细胞已经被用于肿瘤免疫的细胞治疗，并在临床治疗肿瘤(如白血病，淋巴瘤和黑色素瘤)有很好的效果；但不论对第三方细胞库，还是对配送和应用临床管理来说，NK细胞的长期有效储存始终是一个问题。

低温贮藏技术是通过在超低温(-198℃的液氮中)冷冻保存活细胞，降低细胞的代谢速度，调节和控制细胞生长代谢的各种酶的活性受到抑制，使细胞内在的生化反应十分缓慢，甚至停止生长，从而保持细胞活性延长细胞保存年限。现有的细胞冻存液基本都是由细胞基础培养基(如DMEM，RPMI1640等)、胎牛血清(FBS)和二甲基亚砜(DMSO)制备的。其中二甲基亚砜DMSO(dimethyl sulfoxide)的作用是作为冷冻保护剂来保护细胞在冷冻和复苏的过程中免受损伤。DMSO属于渗透性保护剂，它能快速渗入细胞内，减少细胞暴露在有害环境的时间。但是DMSO在常温下对细胞有毒性作用。即使在复苏的过程中移除了绝大部分，但微量级的剩余也会对人体产生副作用(神经毒性，心血管衰竭，呼吸停止和致命的心率衰竭)。有文献报道，使用DMSO冻存的NK细胞在复苏后，其活性和功能性杀伤活力有所退化。此外，细胞冻存液中一般要使用胎牛血清或小牛血清作为保护剂，保护细胞膜，提高冻存复苏过程的细胞存活率。但是牛血清中可能含有疯牛病病毒，内毒素，外毒素，还有潜在的未知病毒风险。胎牛血清FBS会增加动物病原污染的机率，这都会给细胞以后的使用增加不确定因素。

发明内容

本发明的主要目的在于，提供一种NK细胞冻存液及其制备方法和应用，所要解决的技术问题是如何提供一种NK细胞冻存液，能使NK细胞具有较高的细胞存活率，且易配制，成本低。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的一种NK细胞冻存液，其由0.9％氯化钠注射液、人血白蛋白、甘油、维生素C和海藻糖组成。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

优选的，前述的NK细胞冻存液，其中以体积份计，每100份所述NK细胞冻存液包括：10-50份0.9％氯化钠注射液、40-88份人血白蛋白、1-20份甘油和1-20份维生素C；

所述NK细胞冻存液还包括：海藻糖10-60mg/mL。

优选的，前述的NK细胞冻存液，其中以体积份计，每100份所述NK细胞冻存液包括：30-50份0.9％氯化钠注射液、40-60份人血白蛋白、1-10份甘油和1-10份维生素C；

所述NK细胞冻存液还包括：海藻糖30-50mg/mL。

优选的，前述的NK细胞冻存液，其中以体积份计，每100份所述NK细胞冻存液包括：50份0.9％氯化钠注射液、40份人血白蛋白、6份甘油和4份维生素C；

所述NK细胞冻存液还包括：海藻糖50mg/mL。

优选的，前述的NK细胞冻存液，其中以体积份计，每100份所述NK细胞冻存液包括：40份0.9％氯化钠注射液、50份人血白蛋白、4份甘油和6份维生素C；