[发明专利]一种基于MIL-101@SnS2的免疫传感器的制备

权利要求书

1.一种基于MIL-101@SnS₂ QDs的免疫传感器的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）MIL-101@SnS₂ QDs的制备：将单独制备的SnS₂ QDs和MIL-101有机金属骨架结合，制得MIL-101@SnS₂ QDs复合材料；

（2）以SnS₂纳米片作为基底材料，构建标记型MIL-101@SnS₂ QDs的电化学免疫传感器，测定前列腺肿瘤标志物表面抗原含量，绘制工作曲线；

所述SnS₂纳米片的制备步骤如下：

将0.3 ~ 0.6 g SnCl₄·5H₂O分散在30.0 ml H₂O中，磁力搅拌形成透明溶液，然后加入0.3 ~ 0.6 g硫脲作为硫源，将所得混合物转移到50.0 ml高压釜中，并在180 ℃下保持24小时，将所得黄色沉淀物以8000 rpm离心3 ~ 5 min，分别用去离子水和乙醇洗涤三次，材料最终在60 ℃下干燥过夜，得到产物；

所述MIL-101@SnS₂ QDs的制备步骤如下：

单独制备的SnS₂量子点

在25.0 ml H₂O中加入2.0 ~ 3.0 g g SnCl₄·5H₂O和2.0 ~ 4.0 g半胱氨酸，形成透明的前体溶液，此后，将上述混合物在50.0 ml特氟隆内衬的不锈钢高压釜中于180 ℃加热6小时，在自然冷却至室温后，通过离心除去反应物残余物获得黄色上清液；

制备MIL-101有机金属骨架

将3.0 ~ 5.0 g g Cr(NO₃)₃·9H₂O和1.5 ~ 2.5 g对苯二甲酸溶解在48.0 ml去离子水中，然后向溶液中加入0.4 ~ 0.5 ml、40 wt%氟化氢，将混合物磁力搅拌15 min，然后通过超声波混合30 min，混合物在210 ℃反应釜中加热8小时，得到产物，产品分别用N,N-二甲基甲酰胺和无水乙醇洗涤3次，得到MIL-101；

制备MIL-101@SnS₂ QDs纳米复合材料

将得到的MIL-101超声处理，然后将SnS₂ QDs溶液滴加到分散介质中，搅拌2 h，得到MIL-101@SnS₂ QDs复合材料；

所述构建标记型MIL-101@SnS₂ QDs的电化学免疫传感器，步骤如下：

将直径为3.0 ~ 5.0 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；

将6.0 µL、1.0 ~ 2.0 mg/mL的SnS₂纳米片悬浮液滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；

将6.0 µL、5.0 ~ 15.0 µg/mL的前列腺肿瘤标志物表面抗原抗体滴加到电极表面，pH=7.0磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4 ℃冰箱中干燥；

继续将3.0 µL、1.0 ~ 2.0 mg/mL的牛血清蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，pH=7.0磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；

继续滴加6.0 µL、10.0 fg/mL ~ 100.0 ng/mL的一系列不同浓度的前列腺肿瘤标志物表面抗原溶液，用pH=7.0磷酸盐缓冲液冲洗，4 ℃冰箱中干燥；

将6.0 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的MIL-101@SnS₂ QDs检测抗体孵化物分散液滴涂于电极表面，在4 ℃冰箱中静置40 min，用pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗，4 ℃干燥，制得一种标记型MIL-101@SnS₂ QDs的电化学免疫传感器；

所述测定前列腺肿瘤标志物表面抗原含量，绘制工作曲线，步骤如下：

采用10.0 mL、50.0 mmol/L的pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液配制不同浓度的前列腺肿瘤标志物表面抗原溶液，将6.0 µL不同浓度的前列腺肿瘤标志物表面抗原溶液分别滴涂至电极表面，反应0.5 ~ 2 h，晾干后连接至电化学工作站中，分别将电极浸于pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液中测定其氧化还原电流变化，当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10.0 mL、50.0 mmol/L的pH=7.0磷酸盐缓冲溶液中注入10.0 µL、5.0 mol/L的过氧化氢溶液，记录电流变化；

根据所得电流差值与前列腺肿瘤标志物表面抗原浓度呈线性关系，绘制工作曲线；

利用工作曲线法，得到待测样品中前列腺肿瘤标志物表面抗原的浓度。