[发明专利]一种快速检测柑橘三萜、生物碱和酚类物质的方法

说明书

本发明提供一种快速检测柑橘三萜、生物碱和酚类物质的方法，通过配制34种物质的标准品，取新鲜柑桔果皮或果肉用80%甲醇溶液进行萃取三次，合并上清液，然后通过UPLC‑DAD‑FLD共同检测，可同时检测柑橘中的多甲氧基黄酮、黄烷酮、黄酮醇、黄酮、花色苷、生物碱、三萜、酚酸等34种物质，上述物质在22min内实现基线分离。采用两种不同的检测器可同时获得各物质的紫外和荧光光谱信息，提高检测灵敏度，检出限可低至µg/L级，能满足柑橘果皮果肉的分析检测要求。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种快速检测柑橘三萜、生物碱和酚类物质的方法。

背景技术

酚类物质\生物碱是植物中含量最丰富的次生代谢产物，具有抗氧化、抗炎、抗癌、抗菌等作用，对降低多种疾病的发生率，防御紫外线辐射等效果显著。柑橘类水果作为世界上第一大水果作物，品种繁多、资源丰富，富含酚类物质，主要是类黄酮（约为 2/3）和酚酸（约为 1/3），柠檬苦素类，生物碱，抗菌，抗病毒，抗肿瘤，苦味物质。酚类物质种类和含量也是评估柑橘质量非常重要的指标，作为特征成分，广泛应用于柑橘制品营养标签、品种识别等领域。目前关于酚类物质检测的研究报道多为柑橘单一种类（酚酸或类黄酮），且存在耗时长、分离度不佳等问题，不能满足同时快速检测、评价柑橘中主要酚类物质的需求，因此，建立同时、快速检测柑橘中酚酸和类黄酮的方法有着重要意义。

目前柑橘中类黄酮已有 60 余种被鉴定出，柑橘酚酸以肉桂型酚酸为主，可能是膳食酚酸的主要来源，已受到越来越多的关注。Davide 等研究了 3 种柠檬果汁类黄酮及抗氧化性，共测得 8 种类黄酮，其中甜柠檬具有最强的抗氧化性。徐贵华等测得蜜桔中有8 种酚酸。目前，关于同时检测柑橘中酚酸和类黄酮物质的报道较少，Wang 等利用高效液相色谱法检测柑橘中 5 种.酚酸物质和 9 种类黄酮物质，耗时长达65 min。柑橘中酚酸和类黄酮含量检测方法较多，目前常用的为高效液相色谱法，具有易操作、灵敏度高和稳定性好等特点，但存在溶剂用量大、分离度差、耗时长等缺点，如张元梅等检测柑橘中18 种类黄酮物质，耗时长达 60 min。Ehsan 等检测酸橙花中6 种酚酸和6 种类黄酮物质，各耗时 60min；液相色谱-质谱联用技术可用于柑橘酚酸和类黄酮的准确定性和快速定量，但因仪器设备昂贵使其推广受限，He 等利用此技术检测柑橘中3 种酚酸和3 种类黄酮物质，耗时35min；而基于小颗粒填料、低系统体积、快速、超高压等技术的超高效液相色谱（UPLC）具有高效、分离度高、峰形尖锐、成本低、环境友好、结果精确等特点，已逐渐成为食品分析检测的有效工具。

本申请利用超高效液相色谱建立了快速检测柑橘中 34种化合物的方法，在22min 内实现所有成分基线分离，且溶剂的使用量大大降低。目前现有技术还不能满足快速、同时检测柑橘多种主要酚类物质的需要，针对柑橘中主要的 11种酚酸（没食子酸、原儿茶酸、绿原酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、对香豆酸、阿魏酸、芥子酸、水杨酸和苯甲酸）、7种黄烷酮类（圣次草苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素和橙皮素）、4种黄酮醇类（芦丁、杨梅素、槲皮素和山奈酚）、3种黄酮类（香叶草素、木犀草素和金合欢素）、3种多甲氧基类黄酮（川陈皮素、橘皮素和甜橙黄酮）、3种生物碱和三萜（柠檬苦素、辛弗林和诺米林）、3种花青素（天竺葵素、飞燕草素和矢车菊素）含量同时检测的技术尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测柑橘三萜、生物碱和酚类物质的方法，以柑橘类水果为试材，采用超高效液相色谱法，旨在建立一种超高效液相色谱同时测定柑橘中主要酚酸，黄烷酮，黄酮醇，三萜，黄酮和类黄酮含量的方法，满足柑橘中酚酸和类黄酮含量同时检测的需要，为柑橘中活性物质的开发提供技术支撑。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种快速检测柑橘三萜、生物碱和酚类物质的方法，包括如下步骤：

（1）标准品配制