[发明专利]一种促进神经干细胞向神经元分化的长链非编码RNA及其筛选方法

权利要求书

1.一种长链非编码RNA在制备促进神经干细胞向神经元分化的药物中的应用，其特征在于，所述长链非编码RNA为lncRNA Loc102556004或lncRNA Loc102549726，所述lncRNALoc102556004或lncRNA Loc102549726通过慢病毒转染至神经干细胞，可明显促进分化的神经干细胞中神经元标志物Tuj1和MAP2蛋白表达。

2.一种促进神经干细胞向神经元分化的长链非编码RNA的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)、制备中枢神经系统损伤大鼠模型——切割大鼠穹隆海马伞，术后1周分离模型大鼠海马和正常大鼠海马组织，提取海马外泌体；

步骤(2)、通过外泌体与神经干细胞共培养的方法，与正常对照组比较，验证神经损伤组海马外泌体是否可以促进神经干细胞向神经元分化；

步骤(3)、对神经损伤组和正常对照组外泌体进行高通量全转录组测序，构建长链非编码RNA的差异表达谱；

步骤(4)、选取差异表达倍数大于2且P0.05的上调lncRNA进行验证；

步骤(5)、重新提取神经损伤大鼠模型海马外泌体，用Real-time PCR方法对生物信息学分析的差异lncRNA进行验证；

步骤(6)、用Real-time PCR技术对胚胎脑组织中生物信息学分析的差异lncRNA进行检测；

步骤(7)、选取与全转录组测序趋势相一致、同时又在胚胎中枢神经系统中高表达的lncRNA，进行促进神经干细胞向神经元分化的实验；选取促进神经干细胞向神经元分化的长链非编码RNA，包括lncRNA Loc102556004和lncRNA Loc102549726进行实验。

3.一种验证权利要求2所述筛选方法所筛选的长链非编码RNA有效性的方法，包括以下步骤：

S1、在体外神经干细胞培养中，将所选lncRNA Loc102556004和lncRNA Loc102549726通过慢病毒转染至神经干细胞，培养1周后进行相关的检测；

S2、应用Real-time PCR技术检测神经元标记物Tuj1和MAP2 mRNA的表达水平，并与正常对照组Tuj1和MAP2 mRNA的表达水平进行比较；

S3、应用Western blot方法观察神经元标记物Tuj1和MAP2蛋白的表达水平，并与正常对照组Tuj1和MAP2蛋白的表达水平进行比较；

S4、应用流式技术，检测Tuj1阳性神经元占所分化神经干细胞的比例，并与正常对照组Tuj1阳性神经元占所分化细胞的比例比较；

S5、应用免疫荧光技术，检测神经元标记物Tuj1和MAP2阳性神经元占所分化细胞的百分比，并与正常对照组中Tuj1和MAP2阳性神经元占所分化细胞的百分比进行比较；

S6、将上述指标数据进行统计学分析。