[发明专利]一种蛋白酶荧光分光光度快速检测方法在审
| 申请号： | 202110354305.2 | 申请日： | 2021-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN113092426A | 公开（公告）日： | 2021-07-09 |
| 发明（设计）人： | 张晓霞;刘瑞芳 | 申请（专利权）人： | 张晓霞;刘瑞芳 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N1/38 |
| 代理公司： | 北京细软智谷知识产权代理有限责任公司 11471 | 代理人： | 王睿 |
| 地址： | 014000 内蒙古自治区包头市*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白酶 荧光 分光 光度 快速 检测 方法 | ||
1.一种蛋白酶荧光分光光度快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将孵育缓冲液、FITC酪蛋白基质和待测样品混合后，得到第一混合液；
(2)对所述第一混合液进行离心处理，得到上清液和沉淀物；
(3)向所述上清液中加入TCA溶液后，得到第二混合液；
(4)将所述第二混合液与分析缓冲液混合后，得到第三混合液；
(5)将所述第三混合液置于荧光分光光度计中，记录在波长为485nm的激发光下的荧光强度，并监测波长为535nm的发射波强度；
(6)将所述发射波强度与标准曲线进行对照，得到待测样品中酪蛋白的浓度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，选用20μl孵育缓冲液、20μlFITC酪蛋白基质和10μl待测样品。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述待测样品中含有浓度为0-2.5μg/ml的酪蛋白。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述孵育缓冲液中，含有浓度为20mmol/L的磷酸二氢钠和浓度为150mmol/L的氯化钠；所述FITC酪蛋白基质为FITC-荧光素标记酪蛋白。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述离心处理的转速为10000r/min，时间为10min。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述TCA溶液的加入量为150μl，TCA浓度为6.1N。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述分析缓冲液中，含有浓度为500mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，用盐酸将pH值调至8.5。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，将2μl第二混合液与200μl分析缓冲液混合后移入黑色96孔板的孔中，得到第三混合液。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，将30μl第二混合液与3μl分析缓冲液混合后移入试管中，得到第三混合液。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)中，荧光分光光度计中装有485nm的滤光片，能够提供波长为485nm的激发光；并设定发射波波长为535nm，记录发射波强度。
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