[发明专利]一种用于神经干细胞扩增的培养基

说明书

本发明公开了一种用于神经干细胞扩增的培养基，包括基础培养基和添加剂，添加剂包括以下组分：鳞片石墨、酪醇、罗汉果提取物、叶酸、丙谷二肽、表皮生长因子、非必须氨基酸。添加剂中的各组分协同作用，尤其是鳞片石墨、酪醇、罗汉果提取物发挥协同增效作用，其中，鳞片石墨可以作为神经干细胞贴壁培养的载体促进细胞的粘附，和酪醇、罗汉果提取物协同，促进神经干细胞快速分裂和增殖，保持神经干细胞的活性。培养基中的叶酸、丙谷二肽和表皮生长因子、非必须氨基酸为神经干细胞扩增过程提供必要的营养支持，减少细胞老化，提高细胞存活率。本发明提供的培养基成分明确，原料易获取，稳定性高，可充分保障神经干细胞的临床应用。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，尤其涉及一种用于神经干细胞扩增的培养基。

背景技术

神经干细胞(neural stem cell，NSC)是指具有分化为神经元细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力，能自我更新，通过不对称分裂产生除自身以外的其他细胞，并足以提供大量脑组织细胞的干细胞，具有高度增殖和自我更新能力，以此来维持干细胞库的稳定。神经干细胞是未分化的原始细胞，呈巢蛋白阳性，缺乏已分化细胞的抗原标志，不表达成熟细胞的抗原，具有低免疫原性。

神经干细胞已经成为各种神经损伤和退行性的神经系统疾病发病机制研究、药物筛选等的重要工具，也是神经退行性和损伤类疾病细胞替代性治疗的理想种子资源细胞。目前，已经有许多途径可以在体外获得神经干细胞，如从脑组织内原代分离培养获得，多能性干细胞诱导分化获得，体细胞转分化获得。

神经干细胞作为生物医学工程以及体外模型研究中的种子细胞，需要将其在体外进行扩大培养，而如何在体外大规模培养神经干细胞便成为了医学研究的重点。神经干细胞培养基一般由基础培养基、营养添加剂和生长因子组成，基础培养基负责提供细胞生长必须的无机盐、维生素、氨基酸、葡萄糖、有机物等物质，营养添加剂负责提供细胞生长必须的蛋白、激素、微量元素等成分，商售的N2和B27是比较常用的神经干细胞培养添加剂。N2成分简单，只含有胰岛素、转铁蛋白、孕酮、腐胺和硒酸钠五种成分，批次之间均一性比较好控制，但是由于缺乏一些细胞生长需求物，不能长期支持神经干细胞的生长。B27在支持神经干细胞生长方面效果较好，但是其成分复杂，含有动物提取蛋白-牛血清白蛋白，不仅批次之间稳定性难以控制，还会有潜在引入动物源性病原微生物的风险，为细胞替代性治疗带来了潜在的安全隐患。人神经干细胞在目前已有的培养基中增殖能力有限，自发分化比较严重。因此急需提供一种可增强神经干细胞增殖能力的培养基。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于神经细胞扩增的培养基，有效促进神经干细胞的增殖，提高扩增效率。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种用于神经干细胞扩增的培养基，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括以下组分：鳞片石墨、酪醇、罗汉果提取物、叶酸、丙谷二肽、表皮生长因子、非必须氨基酸。

进一步地，以培养基终浓度计，添加剂中各组分的浓度为：鳞片石墨10-20ng/L、酪醇12-15ng/L、罗汉果提取物1.5-4ng/L、叶酸2-3μg /L、丙谷二肽2-5 μg/L、表皮生长因子20-30 μg/L、非必须氨基酸10-15μg/L。

更优选的，以培养基终浓度计，添加剂中各组分的浓度为：鳞片石墨15ng/L、酪醇13ng/L、罗汉果提取物3ng/L、叶酸2.5μg /L、丙谷二肽4 μg/L、表皮生长因子25μg/L、非必须氨基酸13μg/L。

进一步地，所述基础培养基为DMEM/F12。

进一步地，所述非必须氨基酸为精氨酸、脯氨酸和丝氨酸，三种成分的用量比例为1:1:1。

进一步地，所述鳞片石墨的粒径为50-100nm。