[发明专利]一种纳米硒的制备及其在水稻籽粒降镉富硒的方法

说明书

本发明涉及纳米硒制备及应用技术领域，尤其涉及一种纳米硒的制备及其在水稻籽粒降镉富硒的方法，该纳米硒的制备过程包括以下步骤：S1、摇菌：将活化好的巨大芽孢杆菌菌株分别接种于2.0mM亚硒酸钠培养液中，连续摇培46～50小时，得含有纳米硒的培养液；S2、收菌：以8000×g的速度离心8～12min，收集菌体沉淀物；S3、一次离心收集：将含有纳米硒的培养液收集于50ml的离心杯中，置于离心机内以12000×g的速度离心12～18min，去除上清，收集杯底菌体与纳米硒混合物。本发明既可以提高纳米硒的转化率，又能显著地降低在水稻种植中籽粒的镉含量，并提高其籽粒的硒含量。

技术领域

本发明涉及纳米硒制备及应用技术领域，尤其涉及一种纳米硒的制备及其在水稻籽粒降镉富硒的方法。

背景技术

纳米硒具有低毒、生物活性高和环境友好等特点，有研究发现纳米硒可以一定程度缓解及降低水稻植物中镉含量，同时还有研究表明，土壤中的微生物具有还原亚硒酸合成纳米硒的能力。因此，依托广西等地得天独厚的富硒土壤资源，筛选可能高效转化纳米硒的微生物，明确微生物合成纳米硒在重金属污染土壤上应用的重要性。同时也为生物纳米硒对水稻富硒降镉提供技术指导，这对农业的可持续发展和人们身体健康具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种纳米硒的制备及其在水稻籽粒降镉富硒的方法。

一种纳米硒的制备，包括以下步骤：

S1、摇菌：将活化好的巨大芽孢杆菌菌株分别接种于2.0mM亚硒酸钠培养液中，连续摇培46～50小时，得含有纳米硒的培养液；

S2、收菌：以8000×g的速度离心8～12min，收集菌体沉淀物；

S3、一次离心收集：将含有纳米硒的培养液收集于50ml的离心杯中，置于离心机内以12000×g的速度离心12～18min，去除上清，收集杯底菌体与纳米硒混合物；

S4、清洗：向离心杯中加入无菌超纯水对菌体与纳米硒混合物进行清洗，连续清洗三遍；

S5、液氮研磨：将收集的菌体与纳米硒混合物置于无菌研钵中，加入液氮立即研磨，并收集其研磨浆液；

S6、超声分散：收集的研磨浆液先用少量无菌水悬浮，再超声5～7min，之后再加无菌水将其进行充分悬浮，保证终体积约为原始培养液体积的1/2，超声时间≤10min；

S7、真空抽滤：将纳米硒悬液分别用多组滤膜真空抽滤过滤，去除大颗粒杂质；

S8、液-液萃取：将抽滤纯化后的纳米硒悬液转入分液漏斗中，加入1/5～3/5体积的正己烷，充分混合均匀，静置分层，弃除上层含有菌体的有机相，重复操作6～7次，直至上层有机相透明无色没有菌体，回收水相；

S9、二次离心收集：以速度10000×g离心8～12min，收集SeNPs沉淀，同时用无菌超纯水洗涤三遍；

S10、储存：将纯化后的SeNPs，用去离子水进行稀释，转移至新的2ml离心管中，于4℃～5℃密封存放，备用。

优选的，所述摇菌过程中，摇培的温度为28℃～32℃，摇培的速度为150～210rpm。

优选的，所述超声分散过程中，超声的环境为：在冰敷状态下。

优选的，所述真空抽滤过程中，滤膜的规格分别为：20μm、10μm、5μm、3μm、1.2μm以及0.8μm。

优选的，所述真空抽滤过程中，20μm和10μm的滤膜需要用酒精预先浸泡2 min方可使用，且这两种滤膜放置于石英筛上时，糙面朝上，光面朝下。

一种纳米硒应用在水稻籽粒降镉富硒的方法，包括以下步骤：

S1、水稻种子发芽前先用去离子水浮选以去掉瘪粒，置于30% H₂O₂中消毒10～20min，洗净后浸泡在饱和CaSO₄溶液中过夜；