[发明专利]一种高通量筛选赖氨酸脱羧酶的方法有效
| 申请号： | 202110356560.0 | 申请日： | 2021-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN112899262B | 公开（公告）日： | 2023-06-09 |
| 发明（设计）人： | 陈可泉;王昕;许晟;欧阳平凯;刘福建;陈昌主;谭伟民;马仁 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/70;C12N15/60;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 仲凌霞;肖明芳 |
| 地址： | 211816 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通量 筛选 赖氨酸 脱羧酶 方法 | ||
1.一种高通量筛选赖氨酸脱羧酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)向赖氨酸营养缺陷型菌株中导入含赖氨酸脱羧酶基因的质粒，得到重组工程菌；
(2)将步骤(1)所得重组工程菌于含赖氨酸的培养基中培养，通过测定OD600筛选表达赖氨酸脱羧酶的重组工程菌；
步骤(1)中，所述赖氨酸营养缺陷型菌株的构建方法为将大肠杆菌工程菌株MG1655中的lysA基因敲除。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述赖氨酸脱羧酶的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含赖氨酸脱羧酶基因的质粒的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含赖氨酸脱羧酶基因的质粒的构建方法为将PCR复制大肠杆菌工程菌株MG1655中的赖氨酸脱羧酶与载体质粒ptrc酶切后连接。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，PCR复制的引物中，上游引物带有Nco I酶切位点，下游引物带有BamH I酶切位点。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述载体质粒ptrc的核苷酸序列如SEQ IDNo.4所示。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述含赖氨酸的培养基中赖氨酸的浓度为0.1-2g/L。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述培养为先在LB培养基中预培养4-8h，再转接到含赖氨酸的培养基中二次培养10-14h。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述培养的温度为34-44℃。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京工业大学，未经南京工业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110356560.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
