[发明专利]一种酿酒酵母表达长效重组III型胶原蛋白及其在化妆品中的应用

权利要求书

1.一种酿酒酵母表达的长效重组III型胶原蛋白，其特征在于，所述长效重组III型胶原蛋白的氨基酸序列包括基本重复单元及末端氨基酸序列；

所述长效重组III型胶原蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述长效重组III型胶原蛋白的核苷酸序列所对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的酿酒酵母表达的长效重组III型胶原蛋白，其特征在于，所述长效重组III型胶原蛋白的核苷酸序列包括起始密码子、终止密码子及6×His标签序列。

3.如权利要求2所述的酿酒酵母表达的长效重组III型胶原蛋白，其特征在于，所述长效重组III型胶原蛋白的核苷酸序列还包括Not I酶切位点、Xba I酶切位点。

4.如权利要求2所述的酿酒酵母表达的长效重组III型胶原蛋白，其特征在于，所述长效重组III型胶原蛋白的核苷酸序列是通过酵母密码子优化人胶原的核苷酸序列获得的，所述优化包括减少重复序列的重复频率对所述人胶原的核苷酸序列进行人工设计。

5.一种长效重组III型胶原蛋白的活性检测方法，其特征在于，所述活性检测方法采用如权利要求1至4中任意一项所述的长效重组III型胶原蛋白；所述活性检测方法包括试剂配制、测定操作及测定方法。

6.如权利要求5所述的长效重组III型胶原蛋白的活性检测方法，其特征在于，所述试剂包括完全培养液、维持培养液、消化液、噻唑蓝溶液、PBS缓冲液。

7.如权利要求5所述的长效重组III型胶原蛋白的活性检测方法，其特征在于，所述测定操作包括重组人胶原蛋白供试品制备。

8.如权利要求5所述的长效重组III型胶原蛋白的活性检测方法，其特征在于，所述测定方法包括以下步骤：

步骤一、细胞株的培养，所述细胞株为BALB/C 3T3细胞株；

步骤二、制备细胞悬液，将所述细胞悬液接种于96孔板；

步骤三、用维持培养液维持细胞生存；

步骤四、所述细胞的加样处理；

步骤五、根据MTT比色法测定吸光度，记录测定结果，并完成四参数拟合计算；

步骤六、根据测定结果判断所述长效重组III型胶原蛋白的活性。

9.一种酿酒酵母表达的长效重组III型胶原蛋白在化妆品中的应用，其特征在于，其采用如权利要求1至4中任意一项所述的长效重组III型胶原蛋白。