[发明专利]一种人参干细胞的培养方法

权利要求书

1.一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用一步法培养人参不定根，包括：将成熟人参清洗消毒，切片，接种到不定根诱导培养基中诱导出人参不定根；将获得的人参不定根再次接种到不定根诱导培养基中继代培养扩繁；然后将获得的人参不定根剪切成段，接种到液体培养基中培养获得不定根；

所述不定根诱导培养基包括1-6mg/L萘乙酸，0.1-0.6mg/L激动素，0.2-1mg/L赤霉素，0.075-1.5g/L柠檬酸，0.03-1g/L抗坏血酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝胶，1-4g/L B5培养基和1-2.4g/L WPM培养基；

(2)取人参不定根的根尖部分，置于渗透剂溶液中处理；

(3)将处理后的人参不定根根尖部分先放入干细胞诱导培养基中培养，然后转入干细胞扩繁培养基中培养，获得人参干细胞；所述干细胞诱导培养基包括0.6-1mg/L激动素，2-4mg/L吲哚乙酸，0.5-1.5mg/L萘乙酸，25-100mg/L抗坏血酸，50-150mg/L柠檬酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝胶，1-2.4g/L 1/2MS培养基，0.6-1.4g/L WPM培养基；

所述干细胞扩繁培养基包括干细胞扩繁固体培养基和干细胞扩繁液体培养基：干细胞扩繁固体培养基包括2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L萘乙酸，0.8-1.2mg/L激动素，20-60g/L蔗糖，3g/L植物凝胶，1-2.4g/L 1/2MS培养基和0.6-1.4g/L WPM培养基；干细胞扩繁液体培养基包括2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L萘乙酸，0.8-1.2mg/L激动素，20-60g/L蔗糖，1-2.4g/L 1/2MS培养基和0.6-1.4g/L WPM培养基。

2.根据权利要求1所述的一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，步骤(2)中，取人参不定根的根尖部分，置于渗透剂溶液中，低温处理1-10小时。

3.根据权利要求2所述的一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，所述低温为1-6℃。

4.根据权利要求3所述的一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，所述低温为4℃。

5.根据权利要求2所述的一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，所述人参不定根的根尖部分的长度为0.3mm-0.8mm。

6.根据权利要求1所述的一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，步骤(2)中，所述渗透剂溶液选自蔗糖溶液、氯化钾溶液、甘露醇溶液中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，所述渗透剂溶液为1mol/L的蔗糖溶液。

8.根据权利要求1-7任意一项所述的一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，步骤(3)中，干细胞诱导培养基包括1mg/L激动素，2.5mg/L吲哚乙酸，1mg/L萘乙酸，75mg/L抗坏血酸，75mg/L柠檬酸，30g/L蔗糖，3g/L植物凝胶，1.8g/L 1/2MS培养基，0.8g/L WPM培养基。

9.根据权利要求1-7任意一项所述的一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，步骤(3)中，干细胞扩繁固体培养基包括3mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸，2mg/L萘乙酸，1mg/L激动素，35g/L蔗糖，3g/L植物凝胶，1.8g/L 1/2MS培养基和0.8g/L WPM培养基；

干细胞扩繁液体培养基包括3mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸，2mg/L萘乙酸，1mg/L激动素，35g/L蔗糖，1.8g/L 1/2MS培养基和0.8g/L WPM培养基。

10.根据权利要求1-7任意一项所述的一种人参干细胞的培养方法，其特征在于，步骤(3)中，处理后的人参不定根根尖部分在干细胞诱导培养基和干细胞扩繁培养基上，在20-25℃下，分别避光培养，直至接种干细胞长出大量细胞团。