[发明专利]一种用生物反应装置培养人参不定根的方法

说明书

本发明公开了一种用生物反应装置培养人参不定根的方法，包括：(1)将成熟人参清洗消毒，切片，接种到固体诱导培养基中诱导出人参不定根；将(1)获得的人参不定根再次接种到固体诱导培养基中，暗培养；将(2)获得的人参不定根接种到液体培养基中，100‑120rpm，暗培养；将(3)获得的人参不定根接种到含有液体培养基的生物反应装置中，暗培养，获得人参不定根；液体培养基包括：15‑50g/L蔗糖，0.6‑2.4g/L WPM培养基，1‑2g/L N6培养基，0‑150mg/L抗坏血酸，0‑225mg/L柠檬酸和0‑7mg/L吲哚丁酸。本发明从成熟人参直接诱导产生不定根，步骤简单，诱导时间短，配合优化的液体培养基和生物反应装置及培养条件，不定根生长快，增长倍数高。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体地说，涉及一种用生物反应装置培养人参不定根的方法。

背景技术

人参(Panax ginseng C.A.Mey.)是五加科人参属植物，分布于中国、日本、韩国，其根茎是名贵的中药材，号称“百草之王”。人参味甘、微苦，微温，具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智等功效，多用于体恤欲脱，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，惊悸失眠等。人参皂苷是人参主要的活性成分，有抗疲劳、延缓衰老、调节中枢神经系统、提高机体免疫力、改善心脑血管供血不足、抑制肿瘤细胞生产等功效。近年来，人参被广泛地用在各类化妆品、保健品、饮品中，人参的市场前景非常广阔。

目前由于过度采挖、环境破坏等，野生人参资源几乎灭绝，大田栽培是人参的主要来源。然而人参生长缓慢，种植年限长，对环境条件要求严格，其品质易受气候、栽培条件及病虫害的影响，栽培技术复杂以及农残超标、老参地等问题也极大地限制了人工栽培人参的发展前景。大田栽培人参供应难以满足市场的需求。人参组织培养技术周期短，不受季节限制，容易进行大规模的工业化生产，具有很大的发展前景。

但是，一方面，目前不定根一般是由人参愈伤组织诱导产生的，需要先诱导产生愈伤组织，再诱导产生不定根，所需的实验周期长，操作步骤复杂，污染风险较高的问题。另一方面，培养的人参中还存在人参皂苷含量低，含量也不稳定，难以满足应用需求的问题。

申请号为CN201711459037.0的中国专利申请公开了一种野人参不定根组织培养的方法，包括如下步骤：(1)野人参愈伤组织的诱导；(2)野人参愈伤组织的增殖；(3)野人参不定根的诱导；(4)液体培养基中野人参不定根增殖。上述技术方案中，需要先诱导愈伤组织，再诱导不定根，所需要的周期长，过程复杂，且人参皂苷的含量也不高。

申请号为201410698528.0的中国专利公开了一种人参不定根诱导增殖方法，包括以下步骤：将人参组培苗切割成组织小块后接种于固体诱导培养基中诱导形成不定根，将所述不定根切割成不定根小块后接种于液体增殖培养基中进行不定根的增殖培养；其中，所述固体诱导培养基和液体增殖培养基为以1/2MS(-N)培养基为基本培养基含有浓度为1-10mg/L的吲哚丁酸。上述方案中，将日龄为28-32天的组培苗切成小块直接诱导不定根，组培苗幼嫩，分化能力强，且实际上需要先经过种子萌发或者外植体培养获得组培苗，仍然需要至少28-32天的时间，外植体培养仍然需要诱导愈伤组织，且实际上并没有缩短周期。

因此，倘若探索获得一种能够从成熟人参直接诱导产生不定根的方法，可以缩减诱导周期，简化诱导条件，再配合适宜的液体培养基和适宜的生物反应器，能够进行快速扩大生产，则具有广泛的经济意义。

有鉴于此特提出本发明。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种用生物反应装置培养人参不定根培养的方法。本发明的方法从成熟人参的各个部分采用一步法诱导产生不定根，不需要诱导愈伤组织的中间步骤，可以简化诱导步骤、缩短诱导时间，进一步采用优化的液体培养基和对应的适宜的培养条件，不定根生长快，增长倍数高。

为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：