[发明专利]一种基于miR-532-5p及其靶基因调控卵巢颗粒细胞的方法

权利要求书

1.一种基于miR-532-5p及其靶基因调控卵巢颗粒细胞的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：向卵巢颗粒细胞中转染miR-532-5p基因或Pak7基因。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述卵巢颗粒细胞为猪卵巢颗粒细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在进行转染时，按照lipofectamine3000试剂盒的说明书进行。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括卵巢颗粒细胞的分离、接种和传代培养步骤。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，进行所述分离步骤时，采用如下方法：

1)于母猪屠宰后取出卵巢，置于PBS中清洗后，将卵巢保存在38摄氏度的生理盐水中于1小时内分离卵巢颗粒细胞；

2)将卵巢放到预热好的37度生理盐水中清洗干净后，用手术刀将卵巢表面每间隔1毫米均匀轻轻划破，收集卵泡液，将吸取后的卵泡液放入15ml离心管，1000rpm离心8分钟，弃上清，用预热的PBS轻轻吹打均匀清洗离心重复两次；

3)配制的卵巢颗粒细胞培养液为20％FBS加DMEM以及1％的抗生素。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在进行接种前，待卵巢颗粒细胞增殖到85％后，弃掉原培养基，用PBS清洗两次后用巴氏吸管加入1ml胰酶，放入37度细胞培养箱，放置2min后加入新鲜培养基终止消化，将细胞吹打下来，将悬液吸入15ml离心管；最终将细胞用培养液冲匀接种到12孔板中进行培养。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在细胞转染前一天，将处于细胞接种至12孔培养板中，当增殖细胞密度达到35～45％时，进行转染，48小时候后收样。

8.根据权利要去5所述的方法，其特征在于，所述抗生素为青霉素、链霉素和两性霉素。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，进行所述收样时，将RNAisoPlus加入每个孔，裂解一分钟后反复吹打吸出，并将样品于-80℃下保存。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在进行转染时，细胞密度为40％。