[发明专利]一种表达新冠病毒Spike蛋白重组副流感病毒5型制备和应用

权利要求书

1.一种表达冠状病毒Spike蛋白的重组副流感病毒5型载体，其特征在于，所述重组副流感病毒5型载体包含一种副流感病毒5型基因组，所述基因组包含冠状病毒Spike蛋白突变体的编码序列；所述冠状病毒Spike蛋白突变体的编码序列不含有副黏病毒转录终止序列，且冠状病毒Spike蛋白突变体的氨基酸序列上不含有Furin蛋白酶裂解位点；所述副流感病毒5型基因组为：用序列甲替换一种副流感病毒5型基因组的小疏水蛋白基因序列，所述序列甲为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列第927位核苷酸由A突变为G、第3216位核苷酸由A突变为G、第2106位核苷酸由A突变为G，且第2044位至2055位替换为GCA，得到的DNA分子。

2.根据权利要求1所述的表达冠状病毒Spike蛋白的重组副流感病毒5型载体，其特征在于，所述冠状病毒为2019-nCoV。

3.一种在细胞中表达冠状病毒Spike蛋白的方法，其特征在于，该方法包括使该细胞与如权利要求1至2中任一项所述的表达冠状病毒Spike蛋白的重组副流感病毒5型载体相接触。

4.一种表达冠状病毒Spike蛋白的重组副流感病毒5型载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将副流感病毒5型全基因组反转录得到的cDNA插入克隆载体中，得到重组质粒pPIV5；

2)用序列甲替换步骤1)中重组质粒pPIV5中副流感病毒5型的小疏水蛋白基因核苷酸序列；

所述序列甲为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列第927位核苷酸由A突变为G、第3216位核苷酸由A突变为G、第2106位核苷酸由A突变为G，且第2044位至2055位替换为GCA，得到的DNA分子。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述克隆载体为带有T7 RNA聚合酶启动子序列、带有丁肝核酶序列、T7 RNA聚合酶转录终止序列的克隆载体。

6.一种新型冠状病毒(2019-nCoV)疫苗的制备方法，其特征在于，所述疫苗的制备方法包括如下步骤：将权利要求1-2任一所述表达冠状病毒Spike蛋白的重组副流感病毒5型载体、表达辅助蛋白的辅助重组质粒—NP、辅助重组质粒—P和辅助重组质粒—L共转染宿主细胞；所述表达辅助蛋白的辅助重组质粒—NP、辅助重组质粒—P和辅助重组质粒—L是将副流感病毒5型的NP、P和L蛋白的编码基因分别插入哺乳动物表达载体中，得到辅助重组质粒—NP、辅助重组质粒—P和辅助重组质粒—L。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为BSR-T7细胞，MDBK细胞,Vero细胞或BHK-21细胞。

8.权利要求6或7所述方法制备得到的疫苗。

9.权利要求1-2任一所述重组副流感病毒5型载体或权利要求5或6所述方法制备的重组副流感病毒5型载体在如下任一一种中的应用：

(1)制备提高动物体内针对冠状病毒2019-nCoV Spike蛋白抗体水平的产品中的应用；

(2)制备预防或辅助预防冠状病毒2019-nCoV引起的疾病产品中的应用。