[发明专利]一种大口黑鲈脑细胞系及其应用

说明书

本发明公开了一种大口黑鲈脑细胞系及其应用，所述大口黑鲈脑细胞系已于2021年03月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:C202166。本发明所述的大口黑鲈脑细胞系MSBr传代稳定，目前已成功传代超过65代且生长状态良好，且该细胞系适用范围广泛，不仅可用于病毒分离鉴定、病原功能研究、环境污染物检测、基因筛选和功能分析及鱼类肿瘤研究等，同时还可用于水产动物病毒性疾病的监测、诊断及流行病学调查研究，相关病毒性疾病的诊断试剂盒开发和疫苗研制等，具有较大的应用价值和社会经济价值。

技术领域

本发明属于水生生物细胞与水产养殖病害防控技术领域，具体涉及一种大口黑鲈脑细胞系及其应用。

背景技术

水生动物(主要为鱼类)的细胞培养研究晚于哺乳动物，始于20世纪60年代。1962年，Woft和Quimby建立了世界上第一个鱼类细胞系，即虹鳟鱼生殖腺细胞系。此后，鱼类细胞培养研究十分迅速，全世界已报道的鱼类细胞系有275株。我国鱼类细胞的培养始于20世纪70年代末，张念慈等建立的草鱼吻端组织二倍体细胞株是我国首个鱼类细胞系。目前建立的鱼类细胞系大约有70多株，多数来自于海水鱼类。细胞株作为具有生物活性的体外材料，有着活体鱼无法比拟的优点:细胞的培养和维持不需要大型的养殖设备，成本低；细胞个体大小均一，遗传背景极为相似，实验条件可以精确控制，重现性好。因此鱼类的细胞系是进行病毒学研究、环境毒物检测、生理学、免疫学、基因功能分析、细胞工程育种和种质保存等研究的重要材料和模型。目前鱼类原代细胞的建立技术虽然较为成熟，但是要获得针对病毒敏感的传代细胞系仍存着较大的偶然性和困难性，所以建立一株目标鱼类细胞系需要制备大批量的原代细胞株，从而筛选出敏感的细胞系，这是一项费时耗力的工作。

大口黑鲈(Micropterus salmoides)又名加州鲈，隶属于鲈形目、太阳鱼科、黑鲈属，原产地为美国加利福尼亚州密西西比河水系，由于其肉质鲜嫩美味、抗疾病能力强、生长迅速、易起捕、适合温度广的特点被世界各地相互引进。我国于1983年在广东佛山引进加州鲈，并在1985年人工繁育成功。经过40多年的发展，加州鲈已经成为我国重要的经济养殖品种。然而，随着人工集约化程度不断提高，养殖密度持续升高，加州鲈病害层出不穷，尤其是病毒性疾病。弹状病毒以及虹彩病毒是加州鲈病毒性疾病的主要病原。近年来，加州鲈弹状病毒病已在加州鲈苗种培育过程中大量暴发，严重时80％池塘发病，死亡率短时间内可高达90％，用药效果不佳，经济损失巨大。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的缺陷，提供了一种大口黑鲈脑细胞系及其应用，该细胞系传代稳定，目前已成功传代超过65代且生长状态良好，且该细胞系适用范围广泛，不仅可用于病毒分离鉴定、病原功能研究、环境污染物检测、基因筛选和功能分析及鱼类肿瘤研究等，同时还可用于水产动物病毒性疾病的监测、诊断及流行病学调查研究，相关病毒性疾病的诊断试剂盒开发和疫苗研制等，具有较大的社会经济价值。

本发明的目的之一在于提供了一种大口黑鲈脑细胞系，该细胞系已于2021年03月25日保存于中国典型培养物保藏中心，地址为：中国武汉市武汉大学，所述大口黑鲈脑细胞系的保藏编号为：CCTCC NO:C202166。

进一步的，所述大口黑鲈脑细胞系的培养温度为28℃。

进一步的，所述大口黑鲈脑细胞系的培养过程中，胎牛血清的体积浓度为10％或15％。

本发明的目的之二在于提供了上述大口黑鲈脑细胞系的构建方法，所述方法包括：

S1、取大口黑鲈麻醉后，抽干血液后在75％酒精中浸泡2min，然后在无菌条件下取大口黑鲈的脑组织；

S2、将脑组织经无菌PBS缓冲液漂洗后，置于AIM培养液中浸泡30min；

S3、将脑组织剪成1mm³大小，加入胰蛋白酶于28℃消化20min；