[发明专利]一种靶向人高侵袭性脉络膜黑色素瘤的核酸适体QQ-2及应用

说明书

一种靶向人高侵袭性脉络膜黑色素瘤的核酸适体QQ‑2及应用，通过对该条核酸适体QQ‑2的性质表征和靶分子的鉴定，有助于发现脉络膜黑色素瘤的肿瘤标志物，用于脉络膜黑色素瘤的诊治和靶向治疗，制备的核酸适体能特异性识别人高侵袭脉络膜黑色素瘤细胞和脉络膜黑色素瘤组织并具有很高的亲和力；无免疫原性；分子量小，能够体外化学合；核酸适体的不同部位易于修饰和取代。同时，其具有序列稳定，便于保存，方便标记等优势。采用本发明的核酸适体进行人脉络膜黑色素瘤细胞检测时，操作更为简单、迅速，并且本发明核酸适体的合成成本较抗体制备成本低，且周期短，重现性好。

技术领域

本发明具体涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种靶向人高侵袭性脉络膜黑色素瘤的核酸适体QQ-2及应用。

背景技术

葡萄膜黑色素瘤是成人最常见的原发性恶性眼内肿瘤，也是仅次于皮肤的第二常见黑色素瘤类型。肿瘤起源于葡萄膜，包括脉络膜（90%）、睫状体（6%）和虹膜（4%）。葡萄膜黑色素瘤通常无症状，且无特异性的肿瘤血清标志物，诊断主要基于眼科成像技术，包括眼底摄影、荧光素血管造影、眼底自体荧光成像、光学相干断层扫描和超声成像，这也使得葡萄膜黑色素瘤成为少数不主要依靠活检诊断的癌症之一。

葡萄膜黑色素瘤极易发生转移，特别是肝转移。多项研究发现，超过90%的转移病例表现为肝脏病变。肝转移是葡萄膜黑色素瘤患者死亡的最主要原因，超过95%的病人在死亡时都有肝转移。一旦发现转移，葡萄膜黑色素瘤患者的平均生存期只有仅仅６到８个月。而即使局部肿瘤控制情况良好，高达50%的患者仍会在15年内发生转移，导致其预后极差。

该疾病在早期可无症状，造成诊断困难。且现有治疗方案效率低下，尤其是对于高危患者，目前缺乏高效准确的方法来控制其转移。因此，开发一种靶向葡萄膜黑色素瘤的特异性分子探针对葡萄膜黑色素瘤的早期诊断、病情监测和治疗预后具有重要意义。

传统肿瘤识别和靶向治疗依赖抗体。然而，使用抗体作为分子探针往往缺乏理想的药代动力学，而且这种探针在化学修饰和储存过程中很容易失去活性。通过Cell-SELEX筛选技术得到的核酸适体是一类短小的单链寡核苷酸或多肽，能够通过其多种多样的三维构象与多种靶分子结合，具有结合亲和力高、特异性高、合成简单、结构灵活、稳定性好、免疫原性低等优点，是一种有效而有发展前景的分子探针。

Cell-SELEX(SystematicEvolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX) 技术全称是指数富集的配体系统进化技术。其通过靶细胞与体外合成的寡核苷酸文库相互结合，引入负筛细胞（通常为正常细胞）去除非特异性结合寡核苷酸，利用PCR技术扩增与靶细胞结合的寡核苷酸含量，经过十几轮的重复筛选来最大化富集目标核酸链，以此获得高特异性和高亲和性的核酸适体。通过Cell-SELEX技术筛选的到的适体能识别正筛选细胞(目标癌细胞)和负筛选细胞(正常细胞)细胞膜上细微的分子差异，从而能够高效鉴别癌细胞和正常细胞。进一步对这核酸适体的性质表征和靶分子的鉴定，有助于发现新的肿瘤标志物，用于肿瘤的诊治和靶向治疗。

发明内容

为了解决现有技术存在的技术缺陷，本发明提供了一种靶向人高侵袭性脉络膜黑色素瘤的核酸适体QQ-2及应用，该条适体能特异性结合脉络膜黑色素瘤细胞，且其合成成本低，制备简单方便，对脉络膜黑色素瘤细胞选择性好，结合力强，检测灵敏度高，检测过程操作简单，结果准确。

本发明采用的技术解决方案是：一种靶向人高侵袭性脉络膜黑色素瘤的核酸适体QQ-1，包含如下序列：

5’- ATCGATCAGCGGTAGCACTCCGGCTTTGTGGTAGGGAATCAACA -3’，或在所述的序列两端均加上引物序列。

5’端所述的引物序列具有18个核苷酸，3’端所述的引物序列具有18个核苷酸。

所述的5’端的引物序列为ACCGACCGTGCTGGACTC，所述的3’端的引物序列为CTATGAGCGAGCCTGGCG。