[发明专利]一种C5aR抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种C5aR抗体及其制备方法和应用。所述C5aR抗体包括C5aR抗体的重链可变区重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和C5aR抗体的轻链可变区轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种。所述C5aR抗体对人源C5aR蛋白具有高亲和力，能有效阻止C5aR蛋白与C5a的结合，从而下调或切断相应的信号通路，中止体外中性粒细胞的C5a定向迁移；并能够显著抑制中性粒细胞的趋化作用。因此该C5aR抗体能够运用于治疗炎症、血管疾病或神经系统疾病等药物的制备中。

本申请是优先权日为2016年1月12日、申请号为201780003251.7、发明创造名称为“一种C5aR抗体及其制备方法和应用”的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及抗体领域，具体涉及一种C5aR抗体及其制备方法和应用。

背景技术

补体系统是由30多种血浆蛋白和膜蛋白组成，广泛存在于血液、组织液和细胞表面的、具有精密调控机制的蛋白反应系统。补体的主要生理功能是促进吞噬细胞的吞噬能力和溶解靶细胞，因此是机体免疫防御机制的重要组成部分。

C5aR的配体C5a，是补体系统活化产物，是炎症反应的重要介质和趋化因子。C5aR与配体C5a结合后诱导炎症反应并影响凝血及纤溶系统，导致正常组织细胞的损伤，其参与多种疾病的病理过程。C5a是补体裂解片段中显示过敏毒素作用最强的介质，其过敏毒素作用分别为C3a和C4a作用的20倍和2500倍。此外，C5a还可以增加血管的通透性，刺激平滑肌收缩。高浓度的C5a是中性粒细胞、嗜酸粒细胞和单核细胞的趋化剂，可诱导这些细胞顺浓度梯度方向移动。C5a对免疫应答有明显增强作用，可诱导单核细胞分泌白介素IL-l、IL-6、IL-8及肿瘤坏死因子α(TNF-α)等细胞因子的表达，促进抗原及同种异体抗原诱导的T细胞增殖及促进B细胞产生抗体等。

C5aR属于七次跨膜的G-蛋白偶联受体家族。C5aR是对C5a具有高亲和力的受体，其中Kd约为1nM，其位于包括白细胞在内的不同类型的细胞上。每个细胞的受体数量都非常高，每个白细胞可高达200000个位点。C5a还有另外一个受体，称为C5a样受体(c5a likereceptor，C5L2)，但由于其不含G蛋白，又称GPR77。GPR77属于C5a受体亚家族成员，在氨基酸序列上与CD88有35％的同源性，目前其生物学功能仍不明确。

C5aR参与包括风湿性关节炎、牛皮癣、败血症、再灌注损伤和成年呼吸窘迫综合症在内的各种疾病的发病机制(Gerard and Gerard，1994；Murdoch and Finn，2000)。如何阻断C5aR信号的向下游信号通路传导，从而减轻炎症反应一直是免疫学研究的热点问题。目前C5aR和C5a的拮抗剂主要分为抗C5a抗体、抗C5aR抗体、小分子拮抗剂、C5a反义肽、C5a突变体或细菌来源的趋化抑制蛋白等。但是目前仍未有上市的、针对C5aR及其配体的相关拮抗剂新药。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服目前缺少C5aR抗体的不足，提供一种亲和力高、特异性强的C5aR抗体及其制备方法和应用。所述的C5aR抗体与人源C5aR蛋白具有高度亲和力；能够高效地抑制或阻断C5aR与C5a的结合，显著降低钙流信号，从而下调或切断相应的信号通路，中止体外中性粒细胞的C5a定向迁移；并能够显著抑制中性粒细胞的趋化作用；从而给炎症、血管或神经系统的疾病的治疗带来希望。

本发明人以人源C5aR蛋白作为免疫原，采用优化的杂交瘤技术，克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因，可变区基因可以嫁接到人源抗体恒定区基因从而形成人鼠嵌合抗体，即获得C5aR抗体的先导抗体。再通过一系列的对先导抗体的初步生产、纯化和检定，获得与人源C5aR蛋白等蛋白具有高度亲和力；能够高效地抑制或阻断C5aR与C5a的结合，显著降低钙流信号；并且能够显著抑制中性粒细胞的趋化作用的C5aR抗体。然后通过分子生物学方法测序获知C5aR抗体的重链可变区和C5aR抗体的轻链可变区的氨基酸序列。