[发明专利]一种真核重组质粒及其在提高番茄果实色素积累中的应用有效
| 申请号： | 202110370984.2 | 申请日： | 2021-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN113186208B | 公开（公告）日： | 2022-07-15 |
| 发明（设计）人： | 唐晓凤;刘永胜;汪宏涛;李佳男 | 申请（专利权）人： | 合肥工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N9/10;C12N15/113;C12N15/84;C12N15/64;A01H5/08;A01H6/82 |
| 代理公司： | 湖北创融蓝图知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42276 | 代理人： | 羊淑梅 |
| 地址： | 230009 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 质粒 及其 提高 番茄 果实 色素 积累 中的 应用 | ||
1.一种真核重组质粒，其特征在于，由SEQ ID NO：1所示核苷酸序列中的基因片段和真核表达载体pBI121TFM7构成，所述基因片段是SEQ ID NO：1中第115bp至第524bp的核苷酸序列，所述基因片段正向和反向插入真核表达载体，正向插入的基因片段与反向插入的基因片段之间存在有150bp的内含子，所述真核表达载体pBITFM7的构建方法包括：
1)从番茄幼果中提取总DNA，利用PCR技术从番茄中分离得到一个果实特异性启动子TFM7，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
2)将步骤1)获得的果实特异性启动子TFM7替换真核表达载体pBI121中的35S启动子，得到改造后的真核表达载体pBITFM7。
2.一种真核重组质粒的制备方法，其特征在于，步骤如下：
1)在SEQ ID NO：1所示核苷酸序列中选择一段基因片段，所选择的基因片段是SEQ IDNO：1中第115bp至第524bp的核苷酸序列，将所述基因片段正向插入到质粒pSKint载体上形成中间载体，再将该基因片段反向插入已含正向插入基因片段的pSKint中间载体，正向插入的基因片段与反向插入的基因片段之间存在有150bp的内含子。
2)利用限制性内切酶切下pSKint中间载体上含有正向插入与反向插入的基因片段的部分，然后连接到真核表达载体pBI121TFM7上，即获真核重组质粒，所述真核表达载体pBITFM7的构建方法包括：
(1)从番茄幼果中提取总DNA，利用PCR技术从番茄中分离得到一个果实特异性启动子TFM7，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
(2)将步骤(1)获得的果实特异性启动子TFM7替换真核表达载体pBI121中的35S启动子，得到改造后的真核表达载体pBITFM7。
3.权利要求1所述真核重组质粒在提高番茄果实色素积累中的应用。
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