[发明专利]用于生产视网膜色素上皮细胞片层的方法

说明书

本发明涉及用于生产视网膜色素上皮细胞片层的方法。本发明提供了生产细胞片层的方法，该细胞片层包含视网膜色素上皮细胞层和血管形成细胞层，该方法包含层压视网膜色素上皮细胞层和血管形成细胞层的步骤，该血管形成细胞层由具有血管形成能力的血管构成细胞或干细胞组成，并且提供了由该方法获得的细胞片层。本发明还提供了用于移植的细胞片层，其包含用通过体外诱导干细胞或祖细胞获得的视网膜色素上皮细胞形成的细胞层、从这些细胞分泌的基底膜、以及由具有血管形成能力的血管构成细胞或干细胞所构成的血管形成细胞层。

本申请是申请日为2013年8月23日的中国专利申请201380051245.0“用于生产视网膜色素上皮细胞片层的方法”的分案申请。

技术领域

本发明涉及细胞片层的生产方法，其包含层压视网膜色素上皮细胞层和在移植后构成血管的细胞层。本发明还涉及用于移植的细胞片层，其包含从视网膜色素上皮细胞形成的细胞层、基底膜以及在移植后构成血管的细胞层。

背景技术

通过移植细胞片层形式的视网膜色素上皮细胞而治疗视网膜变性疾病的方法，该细胞片层形式接近体内形式。例如，正在实施自体组织移植（例如非专利文献1-3），包括将从年龄相关性黄斑变性患者的视网膜组织切除的视网膜色素上皮细胞的细胞片层（作为脉络膜伴随层）移植到受损黄斑区。源自患者组织的细胞片层是有问题的，这是因为除了移植手术之外，还产生了由于患者视网膜上的切除手术所导致的侵入风险，并发症的发病率高，移植后黄斑功能的改善和稳定保持的有效率低，等等。

作为利用从体外到体内培养的视网膜色素上皮细胞的方法，无需依赖于采集患者视网膜，使用通过在人工膜或羊膜上培养视网膜色素上皮细胞而获得的用于移植的细胞片层，以便掩盖很脆弱的单层上皮的刚度不足，这种方法是已知的。然而，人工膜是不适合移植的，因为它在组成、性质、刚度等方面不同于通过视网膜色素上皮细胞本身体内产生的基底膜，并且容易引起与其相关的炎症和排斥。与此相关，本发明人报导了容易形成由从体外到体内培养的视网膜色素上皮细胞和细胞本身所产生的基底膜所构成的细胞片层的方法（例如，专利文献1等）。由于通过该方法获得的细胞片层具有由活体类似的那些组分构成的基底膜，因此它很容易植入、具有刚性、在处理性方面优异并优选用于移植治疗。

视网膜色素上皮细胞病有时会发展出脉络膜纤维化和萎缩作为并发症，以及脉络膜微血管的不足，并显示出无法供应营养物给视网膜色素上皮和视觉细胞。具有基底膜的视网膜色素上皮细胞片层在这些症状中的移植带来一个问题，即所希望的治疗效果由于缺乏脉络膜微血管而难以实现，其妨碍了移植后对视网膜色素上皮细胞充足的营养物和氧供应以及所移植的细胞体内功能的充分展示。

另一方面，作为利用血管再生的治疗方法，包括移植内皮祖细胞、形成体内血管并治疗视网膜疾病的方法是已知的。例如，专利文献2报导了注射到玻璃体中的骨髓来源的内皮祖细胞定位于视网膜星形胶质细胞中，并入到血管中以形成正常的视网膜血管。然而，通过专利文献2的方法，经利用星形胶质细胞对内皮祖细胞的定位而再生了视网膜血管，但是不可能形成脉络膜血管来保护分开定位的视网膜色素上皮细胞和视觉细胞。

[文献列表]

[专利文献]

专利文献1：WO2011/142364

专利文献2：JP-A-2005-538742

[非专利文献]

非专利文献1：Am J Ophthalmol.2012年1月; 153(1):120-7

非专利文献2：Acta Ophthalmol.2011年9月; 89(6):e490-5

非专利文献3：Br J Ophthalmol.2011年3月; 95(3):370-5。

发明内容

发明要解决的技术问题