[发明专利]一种骨髓间充质干细胞外泌体制剂及促进造血损伤恢复的用途

说明书

本发明属于细胞技术领域，涉及一种外泌体制剂，包括骨髓间充质干细胞来源的外泌体和维生素的制剂。来源于骨髓分离的间充质干细胞后传代培养后纯化获得，可促进放化疗后患者的白细胞、血红蛋白、血小板的增殖，促进造血干细胞增殖，促进单个核细胞的CD34+细胞比例，从而达到促进放化疗后造血功能恢复的作用。

技术领域

本发明属于细胞技术领域，具体涉及一种骨髓间充质干细胞外泌体制剂及促进造血损伤恢复的用途。

背景技术

外泌体是特殊的膜外囊泡，其直径为30～150nm，密度为1.13～1.19g/mL，具有稳定的双分子磷脂结构，能保护其自身携带的DNA片段、miRNA、mRNA以及功能性蛋白等生物活性物质不被破坏。外泌体能通过组织液或血液运输至靶细胞，在作用于靶细胞后释放内容物激活胞内相关信号通路，进而发挥如细胞凋亡、血管生成、再生修复、炎症反应和免疫应答等生物学功能。

骨髓间充质干细胞是骨髓基质干细胞，是人们在哺乳动物的骨髓基质中发现的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。它们对骨髓中的造血干细胞(HSC)不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子(如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等)来支持造血。在标准培养基条件下具有贴壁性；并特定的表面抗原表达，阳性表达如CD29、CD73、CD90、CD105等表面分子；较少表达如CD14、CD31、CD34、CD45、CD11b、CD79α、CD19以及HLA-DR等分子；骨髓间充质干细胞具有多向分化、免疫调节、组织修复和造血支持的功能，已在临床上用于治疗各种不同的疾病，包括骨缺损、移植物与宿主疾病、自身免疫性疾病、血液系统疾病等。因此，骨髓间充质干细胞在组织工程和再生医学应用中具有广阔的治疗前景。

骨髓间充质干细胞具有向中胚层起源细胞分化潜能及自我更新的干细胞特征，是骨髓造血微环境中重要的构成组分及前体成分，参与胚胎血细胞的生成及维持造血，其本身及其衍生分化的基质细胞参与构建不同的造血龛结构，包括成骨细胞龛、基质细胞龛和脂肪细胞龛，经由细胞间多种黏附分子及相应信号通路或可溶性细胞因子直接或间接协同调控造血细胞的生成和分化。

放、化疗是临床治疗恶性肿瘤的常用方法，然而其不良反应很多，其中对骨髓的损伤是最常见的不良反应。放、化疗容易损伤骨髓造血细胞及造血微环境，造成造血损伤。

文献表明间充质干细胞相比其他细胞能够产生足够数量的外泌体，其干细胞的增殖分化特性是通过外泌体进行调控的，间充质干细胞来源的外泌体包含细胞因子和生长因子、信号脂质、mRNAs和调节性miRNA。

叶酸又名维生素B9，是一种水溶性维生素，有促进骨髓中幼细胞成熟的作用，人类如缺乏叶酸，可引起巨红细胞性贫血以及白细胞减少症。

维生素C能通过促进叶酸转变为四氢叶酸，从而促进红细胞的生成与成熟。

维生素B12又叫钴胺素，将甲基丙二酰辅酶A转化成琥珀酰辅酶A，参与三羧酸循环，其中琥珀酰辅酶A与血红蛋白的合成有关。促进红细胞的发育和成熟，使肌体造血机能处于正常状态，预防恶性贫血。

造血干细胞移植是能够重建患者造血的一种方法：造血干细胞能够向下分化为各种成熟血细胞及免疫细胞，如红细胞、血小板、淋巴细胞等，在受者体内完全重建整个造血系统。然而，相当一部分需要进行移植的患者缺乏人白细胞抗原(HLA)相合的供者，HLA配型是限制异基因造血干细胞移植发展的最大阻碍。半相合移植是解决HLA配型相合供者难寻的一个方法，但是，由于供受者之间配型的差异，影响供者顺利植入恢复造血。骨髓间充质干细胞的促进半相合供者植入、加快造血恢复的作用，使得半相合移植方案获得成功。