[发明专利]一种高效液相色谱法测定硝酸甘油软膏中有关物质的方法

说明书

本发明公开了一种高效液相色谱法测定硝酸甘油软膏中有关物质的方法，采用乙腈‑水系统梯度洗脱，通过优化测试条件，不仅可使降解产物1,2‑二硝酸甘油与1,3‑二硝酸甘油色谱峰之间的分离度达到1.5，还可使次级降解产物1‑硝酸甘油与2‑硝酸甘油色谱峰之间的分离度达到1.0，避免了两个次级降解产物(1‑硝酸甘油与2‑硝酸甘油)合并计算成单个杂质的风险。本发明提供的测试方法专属性强，能够精确测量硝酸甘油软膏中的各物质；检测方法灵敏度高，硝酸甘油的检出限为2.1ng；检测方法提高了硝酸甘油软膏有关物质检查的分析准确性，从而可以有效的控制硝酸甘油软膏的质量，具有极强的实用性。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定硝酸甘油软膏中有关物质的方法。

背景技术

硝酸甘油(Nitroglycerol,NTG)为氧化氮供体，其药理作用是松弛血管平滑肌，减轻心脏前后负荷，降低心肌耗氧量、解除心肌缺氧，用于心绞痛急性发作，也用于急性左心衰竭，目前剂型有片剂、注射剂、气雾剂、喷雾剂、贴膜剂等。该类作为血管扩张剂使用的硝酸甘油溶液已收载于《中国药典》2020年版，具体公开了有关物质检查的方法是采用以乙腈-水(50:50)为流动相的高效液相色谱法，其系统适用性要求在相对保留时间约0.4处出现两个降解产物峰(1,2-二硝酸甘油峰与1,3-二硝酸甘油峰)，两峰之间的分离度应大于1.0。

而近年来研究表明，硝酸甘油的同样机理也可用于肛裂的治疗，肛裂局部使用硝酸甘油软膏被称为可逆性化学性的内括约肌切开术，既达到松解括约肌的目的，又无永久性的内括约肌损害，且复发病例重复治疗仍能痊愈。但是，目前硝酸甘油软膏在《中国药典》2020年版及现行国际通用药典中均未见收载，若采用现有硝酸甘油溶液的HPLC色谱条件对硝酸甘油软膏中有关物质进行检测，则存在杂质分离度较差的问题，其降解产物1,2-二硝酸甘油与1,3-二硝酸甘油色谱峰之间的分离度仅约1.0，且其次降解产物1-硝酸甘油与2-硝酸甘油重合成一个峰，大大影响了分析的稳定性。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种利用高效液相色谱法测定硝酸甘油软膏中有关物质的方法，所述检测方法能够提高降解产物的分离度，进而提高硝酸甘油软膏有关物质检查的分析准确性。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种高效液相色谱法测定硝酸甘油软膏中有关物质的方法，包括如下步骤：

(1)供试品溶液的配制：

称取一定量硝酸甘油软膏，加入体积比为50:50的乙腈-水混合溶液适量，水浴加热，冷却至室温后进行冰浴，经过过滤处理，即得每1mL含硝酸甘油1mg的供试品溶液；

(2)对照溶液的配制：

量取制备得到的供试品溶液1mL，用体积比为50:50的乙腈-水混合溶液稀释至100mL，摇匀，即得对照溶液；

(3)测定样品溶液：

量取供试品溶液，用高效液相色谱仪进行定量测定；

其中，步骤(3)中高效液相色谱的测定条件如下：

色谱柱：Waters Symmetry C18色谱柱，250mm×4.6mm，5μm；

流动相：以水为流动相A，乙腈流动相B，梯度洗脱；

流速：0.9～1.1mL/min；

紫外检测器检测波长：213～217nm；

柱温：25～35℃；

进样量：20μL。

优选的，步骤(1)中水浴加热温度为55～65℃，水浴加热时间为30～40min。