[发明专利]一种保健品中β-烟酰胺单核苷酸的快速测定方法

权利要求书

1.一种保健品中β-烟酰胺单核苷酸的快速测定方法，其特征在于：包括以下具体步骤：

（1）保健品前处理

选取一种保健食品，从包装中随机取出若干颗粒，称量每粒保健品质量进行加和，算出其平均值作为保健品的平均质量，将保健品放入研钵中将其研碎，过100-120目筛，装入干净的塑封袋中备用；

（2）浸提处理

称取处理好的样品粉末0.3-0.5 g，平均分装在三个聚四氟乙烯旋盖离心管中，在三个试管中分别加入相同体积的甲醇溶液、体积比为1:1的甲醇和水作为提取液，在冰浴环境下高速均质，其转速为20000-25000r/min，浸提3-5min，将离心管取出后，在冷冻离心机中转速为8000-10000r/min离心2-3min，最后取上清液进行净化处理；

（3）提取液净化及上机检测

将通过步骤（2）所得的三种浸提液分别转入依次用3-6mL甲醇和3-6mL一级水在重力作用下活化好的C18固相萃取柱中，收集净化后的液体于比色管中，用2.5mL注射针管取比色管中上清液，0.22μm有机滤头过滤，将滤液按照一定比例稀释后，利用液相色谱串联质谱仪对处理好的样品进行上机检测，如滤液稀释后检测浓度值超出标准曲线线性范围，则进一步稀释再上机，直至在标准浓度控制的线性范围内；

其中液相色谱条件如下：

色谱柱：Syncronis C18，规格为100×2.1mm，1.7μm；

进样量：10 μL；

柱温：35 ℃；

流速：0.2min/mL；

流动相：A相为含100%乙腈的有机相；D相为含有0.1%甲酸的水相；梯度洗脱条件为：

时间/min	A相/%	D相/%
0.00	10	90
0.50	10	90
3.00	90	10
4.00	90	10
5.00	10	90
6.00	10	90

（4）标准溶液配制

母液制备：准确称取β-烟酰胺单核苷酸标准物质25.00 mg，乙腈定容到25mL容量瓶中，调整浓度为1.0mg/L作为母液；

中间储备液制备：准确移取1.0mg/L母液100μL，乙腈定容至100mL容量瓶中，调整储备液浓度为1μg/mL；

工作液制备：分别移取不同体积中间储备液，按照流动相初始比例配制浓度分别为10ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500ng/mL 、1000ng/mL的混合标准溶液；

（5）化合物优化

质谱条件优化：将步骤（4）制得的浓度为1μg/mL的β-烟酰胺单核苷酸的中间储备液进行质谱条件的优化，通过调整包括喷雾电压、鞘气压力、辅助气压力、毛细管温度、雾化器温度离子源参数，使该物质的母离子和子离子碎片能够达到最大程度的响应，提高β-烟酰胺单核苷酸检测的灵敏度；

液相条件优化：通过调整流动相的流速、液相有机相和水相的比例，以及洗脱条件，提高β-烟酰胺单核苷酸的响应值及灵敏度。