[发明专利]鸽新城疫高免卵黄抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.鸽新城疫高免卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、鸽新城疫病毒灭活抗原的制备；

将鸽源基因VI型新城疫病毒rVI-HZ株接种9日龄SPF鸡胚，48h后收集尿囊液，8000r/min离心30min，取上清，采用PEG沉淀和不连续蔗糖密度梯度方法进行纯化，采用BCA蛋白定量检测试剂盒确定病毒浓度，-70℃保存备用；加入灭活剂BEI，使其终浓度为0.5%，作用24小时后，取液进行灭活检验，-70℃保存备用；所述鸽源基因VI型新城疫病毒rVI-HZ株于2020年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：V202083；

步骤二、鸽新城疫灭活疫苗的制备；

（1）油相制备：按注射用矿物油、司本-80、硬脂酸铝的体积比为94:4:2的比例配制油相；取硬脂酸铝，用注射用矿物油混合，加热融化至半透明状，再与全量司本-80及剩余注射用矿物油混合均匀，经121℃灭菌15分钟，冷却至室温备用；

（2）水相制备：用生理盐水将制备的鸽新城疫病毒灭活抗原进行稀释，使抗原稀释液的血凝效价达到9log₂，取制备的抗原稀释液，加入吐温-80进行乳化，抗原稀释液与吐温-80的体积比为9:1；

（3）将水相和油相按照体积比1:1的比例进行乳化，1000 r/min乳化10分钟，将获得的鸽新城疫灭活疫苗保存于-20℃；

步骤三、鸽新城疫卵黄抗体的制备；

将所制备的鸽新城疫灭活疫苗皮下注射90日龄海澜白蛋鸡1羽份0.2mL，于免疫后第14天加强免疫一次，待蛋鸡开产后，收集鸡蛋；按照1∶2的体积比在1份体积的卵黄液中加入2份体积的pH 7.5的PBS缓冲液，剧烈振荡30s，再加入3.5%的聚乙二醇充分搅拌溶解，室温下作用20 min；4℃、12000r/min离心30 min，2层滤纸过滤，在滤液中加入8.5%的聚乙二醇，充分搅拌溶解，室温下作用20min；4℃、12000 r/min离心30 min，弃去上清液，在沉淀物中加pH 7.4的PBS溶液溶解，加12%的聚乙二醇，室温下作用10min；4℃、12000 r/min 离心30min，去上清，沉淀称重，在沉淀物中加入pH 7.4的PBS溶液溶解，-20℃保存。