[发明专利]一种葡萄球菌蛋白A、纯化制备方法及其应用

权利要求书

1.一种葡萄球菌蛋白A，其特征在于：所述葡萄球菌蛋白A的氨基酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。

2.一种如权利要求1所述的葡萄球菌蛋白A的纯化制备方法，其特征在于：所述方法包括

将来源于葡萄球菌的Protein A蛋白的B功能结构域进行部分位点突变，形成如SEQ IDNO：1的Protein A-1或SEQ ID NO：2的Protein A-2；

构建重组质粒，原核体系诱导表达，表达的重组Protein A蛋白经Ni亲和层析及离子交换层析分离纯化，纯度大于95 %。

3.根据权利要求2所述的葡萄球菌蛋白A的纯化制备方法，其特征在于：所述重组质粒的表达载体为pET30a，宿主菌为大肠杆菌宿主细菌BL21（DE3），经过培养OD600为0.3~0.8时添加终浓度为0.1~1.0 mM的IPTG，于18~37℃ 诱导表达3~8 h。

4.根据权利要求2所述的葡萄球菌蛋白A的纯化制备方法，其特征在于：Ni亲和层析工艺的结合缓冲液含有20 mM咪唑，淋洗缓冲液含有40 mM咪唑，洗脱缓冲液含有500 mM咪唑；选用阴离子交换层析进行进一步纯化，流动相pH为7.0~9.0，采用盐离子浓度增加的方式洗脱目的蛋白。

5.一种如权利要求1所述的葡萄球菌蛋白A在制备亲和介质的配基中的应用。

6.一种如权利要求1所述的葡萄球菌蛋白A在抗体纯化及制备免疫诊断研究试剂中的应用。