[发明专利]一种鸭IL-2基因真核表达重组质粒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种优化的鸭IL‑2基因真核表达重组质粒及其制备方法。本发明首先根据鸭密码子偏嗜性将鸭IL‑2基因进行优化，所得优化的鸭IL‑2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，再将优化的鸭IL‑2基因连接到真核表达载体pCAGGK，得到了鸭IL‑2基因真核表达重组质粒。本发明获得的真核表达重组质粒在细胞内能成功表达鸭IL‑2蛋白，真核表达重组质粒可作为免疫增强剂和免疫佐剂使用，增强鸭类体内细胞和体液免疫反应，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域。更具体地，涉及一种优化的鸭IL-2基因真核表达重组质粒及其制备方法。

背景技术

IL-2在多种免疫细胞中起作用，对Th1细胞有重要分化作用，能增强自然杀伤细胞(NKcell)、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的功能，并且诱导其它细胞因子的产生，如T、B淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞，具有广泛的上调作用。因此，可构建IL-2和其他保护性抗原基因通过共表达提高DNA类制品的免疫效果.

IL-2还能显著地增强IFN-γ和TNF的生成、增强NK细胞的功能、刺激B细胞增殖和诱导B细胞分泌免疫球蛋白。另外IL-2产生的CTL在体内具有显著的抗肿瘤作用，可以诱导和促进淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL细胞)，而NK细胞、CTL细胞、LAK细胞和TIL细胞等在机体的免疫监视及肿瘤免疫方面作用至关重要。IL-2是与T淋巴细胞从细胞周期G1期到S期生长有关的主要细胞因子，其主要的生物活性是诱导CD4+T细胞的产生，并使致敏的CD4+T细胞活性增强，维持其持续克隆增长和在体外的长期生长，从而增强机体的免疫功能。

医学和兽医学的研究证明，IL-2的免疫增强作用主要有以下几方面：活化T细胞；促进B细胞的分化和分泌抗体；活化NK、CTL和LAK细胞；促进其它细胞因子的释放，如IFN-α、IFN-β等；增强淋巴细胞和内皮细胞表面粘附分子的表达；促进淋巴细胞及其它活化细胞的粘附及移动能力；增加抗原提呈细胞表面MHC I和II类分子的量，增强抗原提呈作用。

IL-2已被广泛地应用于免疫佐剂和免疫增强剂的研究。Li J等将鸡IL-2作为佐剂和传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)多聚蛋白基因(VP2、VP4、VP3)DNA疫苗联合免疫SPF鸡然后攻毒，结果表明鸡IL-2质粒能明显增强DNA疫苗对病毒攻击的保护。

发明内容

本发明提供一种根据鸭密码子偏嗜性优化的鸭IL-2基因真核表达重组质粒及其制备方法。具体是构建一种优化的鸭IL-2基因真核表达重组质粒，该质粒可以在细胞内成功表达鸭IL-2蛋白，其可作为免疫增强剂和免疫佐剂使用，增强鸭类体内细胞和体液免疫反应。

本发明的第一个目的是提供一种优化的鸭IL-2基因。

本发明的第二个目的是提供一种含有优化鸭IL-2基因的真核表达重组质粒。

本发明的第三个目的是提供一种构建鸭IL-2基因的真核表达重组质粒的方法。

本发明的第四个目的是提供所述优化的鸭IL-2基因和含有优化鸭IL-2基因的真核表达重组质粒在作为或制备免疫增强剂和免疫佐剂方面的应用。

一种优化的鸭IL-2基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

一种真核表达重组质粒，是嵌入了所述优化的鸭IL-2基因的真核表达载体，也属于本发明的保护范围。

优选地，所述真核表达载体为pCAGGK。